Project title
轉型生長因子第一型受體調控人類滋養層細胞的分化與侵襲機轉之研究
Internal ID
NSC95-2314-B002-277
Principal Investigator
Start Date
August 1, 2006
End Date
July 12, 2007
Partner Organizations
Project Web Site
Mechanisms of Transforming Growth Factor Type I Receptor in the Regulation of Trophoblast Differentiation and Invasion along the Invasive Pathway during Human Pregnancy = 轉型生長因子第一型受體調控人類滋養層細胞的分化與侵襲機轉之研究
Keywords
β型轉型生長因子
第一型受體
人類
滋養層細胞
侵襲
Description
生長因子及細胞素在滋養層細胞的侵襲路徑上，扮演著分化與增殖重要的調控角色；其中，β型轉型 生長因子是一種重要的抑制生長的細胞素，同時控制著許多基本的細胞行為，如移動、黏附、分化與對微 環境的改變。β型轉型生長因子訊息傳遞，依靠因子與受體複合體的結合、激活絲氨酸/蘇氨酸的動力.、 再活化Smad 蛋白質、最後進入胞核對啟動標的基因產生轉錄而發生作用。β型轉型生長因子受體的內移 或內質體交通，均可對β型轉型生長因子訊息傳遞鏈產生調控。由目前的交叉結合分析也證實，胎膜與滋 養層細胞在各週數均表現不同程度的betaglycan、第一及第二型的β型轉型生長因子受體。 在這計劃中，我們將使用以SV40 轉型的滋養層細胞細胞株，培養於有(實驗組)或無(控制組)使用 Matrigel 塗層的載玻片上，於6、24、48、72 小時的時間點去觀察滋養層細胞型態的變化，以及各時間點 的細胞其第一型β型轉型生長因子受體表現是否有差異。根據文獻，當滋養層細胞細胞株培養於Matrigel 塗層的載玻片上，將大幅使侵襲能力增強；我們首先使用transwell 分析滋養層細胞細胞株是否因Matrigel 的塗層而加強侵襲能力；同時，若侵襲能力確實受到誘導，我們也將收集培養皿中的細胞，分析其侵襲能 力的誘導，是否與第一型β型轉型生長因子受體訊息核.酸的表現(使用實時間定量聚合.反應分析)、或 第一型β型轉型生長因子受體蛋白質的調控(使用西方氏墨點免疫反應的半定量分析)有關。 在第二步驟中，我們將使用滋養層細胞侵襲能力的正向(包括全β型轉型生長因子的抗體、第三型β 型轉型生長因子的反義核.酸、及第一型β型轉型生長因子受體的抗體)或負向(全β型轉型生長因子)調控 因子，去重覆以上的實驗。同時以型態觀察、或第一型β型轉型生長因子受體的染色，確認這樣的處理， 是否可誘導出滋養層細胞侵襲或靜止的特殊表現型態，以及這些表現型態是否與第一型β型轉型生長因子 受體的表現有關聯。並以trasnwell 分析確認這些處理真如預期將造成侵襲能力的改變；同時在不同時間點 收集培養皿中的培養液去分析TGFβ3 的蛋白質表現(酵素連合免疫分析)。 最後的步驟，我們將以全時間錄影顯微鏡去建立體外培養的動態滋養層細胞動力模式，去發現或驗證 滋養層細胞的特定侵襲或靜止性狀。在吾人先前發表的論文中預測，單極蝌蚪狀的滋養層細胞為侵襲態的 特化、而星狀滋養層細胞則為滋養層細胞靜止或探索的特定型態。綜括以上，我們將探究第一型β型轉型 生長因子受體對滋養層細胞的分化與侵襲之調控，並建立其與滋養層細胞的特定表現型態之相關。本實驗 有助拼湊及瞭解在滋養層細胞在人類著床時期的未知表現，甚或於未來可應用本計劃的結果，去設計第一 型β型轉型生長因子受體的信號干擾訊息核.酸(口服或注射型)來治療因滋養層細胞侵襲動力不足的疾病 (如子癲前症)。