Project title
建立體外三維共同培養模型研究人類絨毛外滋養層細胞之侵襲與血管轉型過程
Internal ID
NSC94-2314-B002-194
Principal Investigator
Start Date
August 1, 2005
End Date
July 12, 2006
Investigators
Partner Organizations
Project Web Site
Establishment of an in vitro Three-Dimensional Co-Culture Model to Study the Process of Invasion and Vascular Remodeling of Human Extravillous Trophoblast during Pregnancy = 建立體外三維共同培養模型研究人類絨毛外滋養層細胞之侵襲與血管轉型過程
Description
成功的胚胎著床仰賴胎盤的絨毛外部滋養層細胞的增殖、對母體蛻膜的侵襲，及對子 宮螺旋動脈的成功轉型。可惜的是，我們對此過程的瞭解多半來自於早期流產所獲得的組織 切片染色所得的觀察，組織來源有限，而且所得資訊為片段組像，無法知道整個動態過程的 來龍去脈。為進一步瞭解這些著床時參與細胞的互動，吾人設計的新實驗，主要在創造一個 三維立體的共同培養系統，以觀察第一周產期的滋養層細胞，與蛻膜組織，一同在纖維蛋白 形成的立體環境，在低氧氣的狀況下共同培養，再藉調控血管生成因子及轉型生長因子，觀 察其侵襲能力的差別，及絨毛外部滋養層細胞生成血管的能力。 這計劃的第一步驟在於培養純化第一周產期的滋養層細胞，接著我們將使用買來的串 珠置於培養液中去吸附滋養層細胞，而後再行封入纖維蛋白的三維凝結體內，以作下列不同 的處理與觀察。首先我們觀察含滋養層細胞纖維蛋白的三維凝結體，當其表面與蛻膜組織在 低氧環境做共同培養，觀察在有蛻膜組織存在下，其對滋養層細胞侵襲能力的影響，這同時 也可觀察: 蛻膜組織對滋養層細胞活動力的影響，是否必須透過細胞間的直接碰觸；同時也 觀察滋養層細胞是否也形成微血管通道的能力。第二個實驗，則在於使用不同濃度的貝他型 轉型生長因子(TGFβ)及血管生因子(VEGF)在不同天數的調控，以觀察在缺乏蛻膜組織的情 況下，是否仍可造成滋養層細胞往外侵襲，藉以驗證蛻膜組織對滋養層細胞的影響，是否藉 由以上所述因子的調控，並以EDTA 及胰蛋白將細胞自纖維蛋白的三維凝結體中洗出，再 以RT-PCR 作這些VEGF 基因路徑的半定量驗證。 最後的步驟，先培養HUVEC 作為子宮螺旋動脈內皮細胞的替代品，再將紅色螢光的 基因片段(DasRed)以lipofectamine 接入HUVEC，同時也將綠螢光基因片段(FITC)同樣接入 滋養層細胞。完成後再各別以串珠吸附，進而同時封入纖維蛋白的三維凝結體，重覆以上的 蛻膜共同培養、生長因子的調控，觀察這兩種細胞的互動，以瞭解懷孕期間滋養層細胞如何 取代內皮細胞，以完成血管轉型的步驟。 本實驗的特性，在建立此獨特的三維共同培養系統，模擬著床初期的生理環境，非一 般單層細胞二維培養系統可比擬，同時三維繫統的細胞型態可輕易的觀察，不像二維細胞均 是扁平貼附培養皿，其型態與在生理環境的自然狀況無法比擬。