Penicillin Acylase Production by Recombinant E. coli
Date Issued
2004
Date
2004
Author(s)
Kuo, Chiu-Mei
DOI
zh-TW
Abstract
盤尼西林醯化酶(penicillin acylase)於製藥工業上常被利用來生產6-APA(6-amionpenicillanic acid)以製造半合成抗生素，而盤尼西林醯化酶是一種微生物酵素，故本研究是利用搖瓶培養基因重組之大腸桿菌HB101(pTrcKnPAC2902)生產盤尼西林醯化酶。實驗首先探討添加Glycerol、Leucine、Proline及Thiamine於培養基中之最適化濃度，接著利用相互混合添加及不同添加方式，尋求酵素產量最多之添加物及添加方式。
由實驗結果得知，個別添加Glycerol、Leucine、Proline及Thiamine之最適化濃度分別為2.5、0.25、0.2及0.003 g/L，其中又以添加Glycerol所生產之酵素為最多。接著利用Glycerol、Leucine、Proline及Thiamine相互混合添加，對於酵素產量並無加成性地增加，且所生產之酵素量皆不如單獨添加Glycerol多，而特別的是當同時添加Glycerol與Leucine時，對於菌體生長及酵素生產皆明顯受到抑制，因此便利用(1)將Leucine延後至Glycerol耗盡時(24 hr)添加。(2)培養至24 hr時，添加NaOH使培養基中的pH產生先降後升之現象。此兩個方法皆對於菌體生長及酵素生產有所改善，又以後者較佳。
除此之外，亦利用Glycerol進行不同添加方式之實驗，其酵素產量皆少於初始培養即加入Glycerol之方式。而由諸多實驗中吾提出一假設：菌體將Glycerol代謝成未知成分X (pH下降)，過程中主要弁酮偯飢U生長；待Glycerol耗盡，未知成分X即又被代謝成另一未知成分Y (pH上升)，此過程中則主要助益酵素生成，而此假設也隨後於利用不同添加量的醱酵液(不同培養時間)之實驗中獲得證實。
Subjects
甘油
脯胺酸
白胺酸
硫胺素
Thiamine
Proline
Glycerol
Leucine
Type
thesis
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