Development of monoclonal antibodies against the neuraminidase of H7N9 influenza virus for diagnosis applications
Date Issued
2016
Date
2016
Author(s)
Dong, Jhih-Shiang
Abstract
2013年中國爆發人類感染H7N9禽流感疫情，經分析此新型流感病毒後發現，其基因片段由數種低病原性病毒 (low-pathogenicity avian influenza, LPAI)，重排 (reassortant) 而來。禽鳥為H7N9之自然保毒者 (reservoir)，染病後並無明顯病徵，疫情監控相對不易。人類主要感染途徑為接觸帶原禽鳥，受感染人類重症率及死亡率都相當高，且台灣曾有4名境外移入病例，故發展快速篩檢平台成為防疫之重要的議題。流感病毒表面之神經胺酸酶 (neuraminidase, NA) 為重要表面抗原，與血球凝集素 (hemagglutinin, HA) 在不同亞型間皆有高度的變異性。同時NA帶有切割唾液酸與半乳糖間醣苷鍵的酵素催化活性，在病毒散播上為最主要的推手，更是目前開發抗流感藥物與作為病毒篩檢之抗原標的。本研究目標在於針對H7N9之NA製備抑制性單株抗體，並期望此單株抗體能投入篩檢平台之開發，協助H7N9疫情監控。本研究嘗試兩種抗原免疫策略，其一利用軟體預測NA序列上，適合之胜肽片段作為抗原 (NA-1、NA-2及NA-3)，其二乃利用桿狀病毒-昆蟲細胞表現系統，表現N9NA球狀頭部區域重組蛋白作為抗原，分別進行小鼠免疫以製備單株抗體。結果顯示，策略一以NA-3胜肽片段製備得可辨認N9NA重組蛋白之單株抗體，而策略二，最終篩得兩株抗NA單株抗體。經抗體分型試驗，確認此三株抗體皆為IgM。進一步由enzyme linked lectin assay (ELLA) 評估抗體對NA切割醣類之抑制能力，結果發現，策略一以NA-3胜肽片段製備之單株抗體 (1B11)，無抑制NA活性之能力，後續將再針對策略二所得之單株抗體進行分析，期望能得到具有抑制NA活性之單株抗體，將有助於了解NA對宿主的致病機轉。未來更期望單株抗體能投入臨床診斷平台之開發，達到疫情監控及防疫之目的。
Subjects
influenza A virus, avian influenza
neuraminidase
monoclonal antibody
Type
thesis
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Name
ntu-105-R03b22051-1.pdf
Size
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