Selection and Verification of STAT3-specific Aptamers and Decoy Oligonucleotides
Date Issued
2016
Date
2016
Author(s)
Hu, Siou-Wei
Abstract
STAT3 (Signal Transducers and Activators of Transcription 3, 訊息傳導及轉錄激活蛋白3) 為細胞中重要的轉錄因子蛋白，當STAT3受到細胞外的訊息分子刺激時，位於細胞質的STAT3會磷酸化以及二聚體化，接著轉位至細胞核後，DNA binding結構域會和目標基因的啟動子上的特定序列鍵結，而轉錄活化該目標基因的表現。STAT3異常的持續活化和許多腫瘤形成有關，因此調控STAT3在癌細胞中的表現具有重要的研究價值。在許多調控方法當中，STAT 3-圈套寡核苷酸 (STAT3-decoy oligonucleotide, STAT3-dODN) 為一段模擬目標基因的啟動子上的特定序列，能與STAT3之DNA binding結構域鍵結，進而抑制STAT3下游基因表現。 本研究的實驗中針對STAT家族的六種蛋白質同時進行篩選，發現此方法適合用於判斷哪種蛋白質會在同時篩選中附著最多的DNA，但是可能並不適合針對每一種STAT蛋白質篩選出對其專一性的DNA序列，此外STAT1蛋白質也許並不適合作為STAT3目標蛋白的反向篩選蛋白質。 在本研究中，將以已知的圈套寡核苷酸候選序列作為篩選的資料庫 (library pool)，STAT3作為目標蛋白，透過系統性配位子指數增益演繹技術 (Systematic Evolution of Ligands by Exponential enrichment, SELEX) 篩選出與STAT3有高度專一性與親合力的適體，並且以ELONA (ELISA-mimic enzyme linked oligonucleotide assay) 驗證篩選獲得的適體之專一性與親合力，透過MTT細胞存活率試驗探討篩選得到的序列對於細胞的影響。在本研究中，找到了具有對STAT3高度親合力的適體序列dODN-18與dODN-20，與過去研究的dODN-pi相比有更高的親合力，同時它們也對細胞的存活率有初步的影響。
Subjects
Signal Transducers and Activators of Transcription 3 (STAT3)
decoy oligonucleotide (dODN)
aptamer
Systematic Evolution of Ligands by Exponential enrichment (SELEX)
Type
thesis