以雙色cDNA微陣列技術探討同半胱胺酸對血管內皮細胞之作用
Date Issued
2003
Date
2003
Author(s)
黃瑞仁
DOI
912314B002289
Abstract
本 計畫主要是建立基因微陣列(cDNA microarray)之數據分析篩選出差異表達基因，並
選出血管新生相關之基因群。在人體不易取得之腫瘤組織開始實驗及分析前，我們先以細胞
培養模式，使研究工作者熟習細胞培養技術，RNA 之抽取及cDNA 微陣列晶片之實驗技術，取
得影像資料後再加以統計分析，建立研究平台。
初 步研究重點為藉由cDNA 微陣列技術來探討在不同濃度及時間下同半胱胺酸
(homocysteine ，Hcy)對 培養血管內皮細胞的影響。因此，現階段著重分離臍帶靜脈血管內
皮細胞 ((HUVEC)技術之建立和細胞培養技術之穩定。我們可成功地從新生嬰兒的臍帶分離出
原始臍帶靜脈血管內皮細胞 ((primary cells)，以完全培養液在37 ℃及5 ％ CO2 培養箱中培
養，每隔二至三天，更換新的培養液。待細胞長滿後，繼代培養之。另外為了確定分離出的
細胞是否為血管內皮細胞，而非纖維母細胞 (fibroblasts)或是平滑肌細胞(smooth
muscle cells)，我們先利用光學顯微鏡觀察細胞，培養的HUVEC 為同種的 ((homogenous)且
單層地 ((monolayer)貼附生長；細胞外形呈多邊形，具有典型〝cobblestone 〞外觀。同時也
擬利用immunocytochemistry 的方法來鑑定內皮細胞上特有的marker 蛋白質，如CD-31 、
factor VIII-related antigen ，佐證我們所培養的細胞為內皮細胞。除此之外，在測試Hcy
對HUVEC 細胞的作用之前，我們欲先取第二代至第四代的正常HUVEC 細胞，利用RNA pure Kit
(Genesis 代理)萃取RNA ，檢查RNA 濃度及純度；若RNA 濃度或純度太低，考慮是否要增加細
胞數目或改良萃取方法。以估算未來從事cDNA microarray 所需的細胞數目及RNA 濃度，決
定要取多少細胞來進行Hcy 測試較為恰當。
Publisher
臺北市：國立臺灣大學醫學院內科
Type
report
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