缺血後再灌流細胞傷害之酪氨酸激妹調控機制(I)大鼠腎臟模式
Date Issued
2003
Date
2003
Author(s)
賴明坤
DOI
912314B002408
Abstract
腎臟移植後延遲發揮功能是因缺血後再灌流造成腎小管傷害發生細胞凋亡現象所
致。這傷害可能因再灌流血液中富含氧氣而釋放自由基有關。前人研究氧化狀態誘發
腎絲球細胞凋亡與細胞內訊息傳遞路徑，特別是酪胺酸激脢(PTK)–c-Jun/AP1 有關。
本研究室近來發現因缺血後再灌流造成細胞凋亡可以使用自由基清除劑減少腎小管傷
害。以水溶性碳六十前處理離體腎或活體腎均明顯減低腎傷害與細胞凋亡現象並且調
控數種凋亡基因。然而目前對氧化自由基傷害及隨後復原中酪胺酸激脢訊息傳遞路徑
了解不多。 本研究目標是分析缺血後再灌流中訊息傳遞的路徑並提供保存器官功能之
機制以利腎臟移植。
本研究以活體大白鼠兩側腎動脈遭阻斷四十五分鐘後再遭受不同時段的血液灌流
造成急性腎衰竭作為研究模式，探討腎臟遭受缺血後再灌流之訊息傳遞的情形。為涵
蓋不同之傷害及復原階段變化，缺血再灌流腎臟在處理後0, 4, 24, 72, 240 小時摘
下分離純化RNA。這些RNA以一組de-generated DNA 引子PCR增幅一段 PTK 基因族群之
保守區間DNA。長度 170 base pair 的PCR產物和 TA-vector 接合後以便進行 DNA 定
序工作，經ampicilin抗生素篩檢正確接合質體。逢機挑選出菌株以DNA定序然後再以
Dig作成探針。 排除相同的基因之後所有探針混合對先前選殖的PTK library 進行雜
交。沒有黏合的菌株再逢機挑出菌株作DNA定序然後以Dig 作成探針，這些排除相同之
Dig探針又和相同的colony lift 膜進行雜交以排除相同的基因。這種排除雜交法重複
三到四次便可大量的篩檢每一個PTK基因。本研究將使用可容4000 colonies 的colony
lift 膜以達到選中每一個PTK 基因的可能，由於排除雜交法實際上涵蓋所有在膜上的
每一個菌株，其測出篩檢的敏感度會在0.025% 左右。每一株個別的PTK 基因以 Dot
blot 方式做成一張含有全部篩檢到PTK基因的分析膜，再以不同缺血處理之腎臟RNA反
轉錄做成一組特異性cDNA Dig探針和此分析膜作雜交即可得缺血處理間不同PTK 訊息
傳遞之圖譜結果。比較處理間圖譜可望得到訊息傳遞之路徑基因調控。
本研究成果可解釋缺血後再灌流傷害中有關PTK 訊息傳遞的機制及移植時可能的
腎臟功能保存方法，或減低缺血時細胞傷害。另外由本研究衍生的PTKs 基因library
膜可提供其他用大白鼠為模式的研究PTK 者使用。
Subjects
細胞凋亡
缺血／再灌流
訊息傳遞
蛋白質酪胺酸激脢
Publisher
臺北市：國立臺灣大學醫學院醫學系
Type
journal article
File(s)![Thumbnail Image]()
Loading...
Name
912314B002408.pdf
Size
72.38 KB
Format
Adobe PDF
Checksum
(MD5):d54506b3f747d64c1da3ec1ff69e4315