On-column concentration techniques in gradient capillary electrophoresis and application of silica nanoparticles to separation of amines
Date Issued
2004
Date
2004
Author(s)
Kuo, I-Ting
DOI
zh-TW
Abstract
本論文分為兩部份：第一部份為在有電滲透流（electroosomotic flow，EOF）的存在下，利用聚環氧乙烯（poly(ethylene oxide)，PEO）為篩分介質進行毛細管電泳分離雙股DNA的實驗。第二部份為在低pH值的條件下，探討二氧化矽奈米粒子對生物胺分離的影響。第一部份的實驗成它a利用1.0% 8MDa 的PEO聚合物溶液在12分鐘內，將範圍從51 bp-23 kbp的DNA片段完全分離。在此條件下，不但大片段的DNA被完全分離開，甚至達到單一鹼基的解析度（123/124 bp）。和傳統的條件相比（在沒有電滲透流存在下），此技術提供較快速和較好解析度的分離優點。為了達到線上濃縮與分離DNA的結果，本研究發展了在有電滲透流存在下進行PEO聚合物溶液濃度和ethidium bromide（EtBr）濃度的梯度變化來分離雙股DNA。在電滲透流存在下，大片段的DNA較快遷移至負極端，因此在樣品進樣後，將PEO聚合物溶液和/或EtBr濃度由稀至濃引入毛細管中。利用此方法，我們成它a將在30公分高處以壓力進樣120秒之樣品完全分離開，並得到數十倍的濃縮效率。這樣的結果證明了利用梯度電泳來分離DNA的潛力，可以應用在基因分析-如限制片段長度多型性（restriction fragment length polymorphism，RFLP）、單股構型多型性（single-strand conformation polymorphism，SSCP）等。另外在第二部份的實驗中，嘗試在低pH值的環境下，加入二氧化矽奈米粒子，探討二氧化矽奈米粒子對胺類分子分離的影響，並將之應用到真實樣品中。結果發現加入二氧化矽奈米粒子可以縮短分析物的分離時間，如Tryptophan的分離時間縮短了將近8分鐘左右，甚至可以偵測到本來偵測不到的萘乙酸（1-NAA）。二氧化矽奈米粒子雖會消弱分析物的螢光，但其存在可以減少吸附，使訊號波寬變窄而造成某些分子的螢光訊號強度是增加的。這樣的結果對快速檢測真實樣品（如尿液）有極大的正面意義，可以在較短的時間內檢測到更多尿液的成份。
Subjects
毛細管電泳
二氧化矽奈米粒子
梯度濃縮技術
DNA分離
gradient concentration techniques
DNA separation
silica nanoparticles
capillary electrophoresis
Type
thesis
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Name
ntu-93-R91223004-1.pdf
Size
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Format
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