以基因剔除技術研究cullin-4B的功能 III
Date Issued
2005
Date
2005
Author(s)
林淑華
DOI
933112B002039
Abstract
Cullin 蛋白藉由組合成不同的泛素連接酶，以調節細胞內各種重要的蛋白質，而此
一調節是經由泛素-蛋白降解體路徑來完成。迄今cullin 家族已有七個基因被發現，而我
們的主要研究對象- Cul4B 是否參與調控與發育相關的蛋白仍待釐清。Cul4B 在許多種
組織都有表現，包括腦部、睪丸、卵巢、攝護腺、結腸、脾臟、肝臟及周邊血球細胞甚
至整個胚胎都可偵測到。為了解Cul4B 的功能，我們同時藉由建造動物模型及細胞培養
的方式來回答此一問題。首先希望建立組織特異性Cul4B 基因剔除小鼠而能在不同的器
官研究此蛋白質在活體內的功能，我們已建構好Cul4B 條件式基因剔除載體，並用以轉
染107 小鼠胚胎幹細胞。由抗生素篩選得到的264 個細胞株中，經由南方墨點法的分析，
共得到8 個標的成功的細胞株。取出囊胚期卵子，注射幹細胞後，植入代孕母鼠，共產
出5 隻嵌合鼠。嵌合鼠與黑色B6 母鼠互配後，得到了栗色毛的子代，證明其遺傳來源
為胚胎幹細胞，且為Cul4B 基因標定的異型合子。由此一異型合子交配而得到同型合子
後，再與特定在肝或生殖細胞表現Cre 的轉殖鼠互配，便可得到組織特異性Cul4B 基因
剔除鼠，以作為進一步研究Cul4B 功能的材料。
同時，我們也應用生化學的方法來研究Cul4B 的功能。首先，建立會表現myc 標
記的Cul4B 蛋白之細胞株，並以共同免疫沈澱的方式將細胞內與Cul4B 有交互作用的
蛋白沈澱下來；經由電泳分離後，將特定位置的蛋白切下，以質譜分析鑑別。經由此一
程序，發現TIP120A 及DDB1 與Cul4B 有交互作用；其中，TIP120A 已知會以負調控
的方式調節多種泛素連接酶，而先前的研究則發現DDB1 是Cul4A 的轉接蛋白，並且
參與細胞週期的調節。這暗示Cul4B 在正常生理狀況下可能會以相似於Cul4A 的作用
方式進行蛋白質降解之調節。
本實驗室未來的目標是分析Cul4B 基因剔除鼠的表現特徵，以及繼續用共同免疫沈
澱法找尋與Cul4B 有交互作用的蛋白，以建立由Cul4B 組成的泛素連接酶調控體內蛋
白表現的模式。
Subjects
cullin 4B
ubiquitin 連接酶
組織特異性基因剔除鼠
Cre-LoxP
Publisher
臺北市：國立臺灣大學醫學院醫學檢驗暨生物技術學系
Type
other
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