Cloning and Expression of Sweet Potato Tuber Sucrose Phosphate Synthase Gene in Escherichia coil
Resource
Taiwan Journal of Agricultural Chemistry and Food Science 45 (2): 91-100
Journal Volume
45
Journal Issue
2
Pages
91-100
Date Issued
2007
Date
2007
Author(s)
Abstract
選殖自甘藷塊根之蔗糖磷酯合成醇(SPS)基因，經大腸桿菌系統加以表現。其cDNA經表現後可轉譯出1048個胺基酸，分子量為116kDa。所推導出的胺酸序列，與菠菜和馬鈴薯者分別有66及80%同質性；且具有可進行磷酸化之可能區位，用以表現對光照和滲透逆境之調控。SPS基因經與質體pET21b重組次選殖後，轉型於大腸桿菌(Escherichia coli)BL21(DE3)菌株中加以表現。其表現出分子量在116kDa之蛋白質，以His-tagged親和層析管柱及FPLC Mono-Q陰離子交換層析法純化後，測定活性並分析其性質得知：Glc 6P和Pi不具有異位調控；對基質UDPGlc和Fru 6P之K(下标m)值分別為21.3和7.3mM；其酵素比活性為0.92µmol/min/mg protein；而反應之最適pH為7.5；表現之酵素會受Mg(上标 2+),Ca(上标 2+)和Mn(上标 2+)活化；核苷酸UDP及UTP則可抑制30-40%活性；而糖及糖磷酯對表現之SPS活性影響不大。
Type
journal article
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