合成含2-氧基組胺酸與犬尿胺酸之多?並鑑定與其交互作用之蛋白質
Other Title
Synthesis of 2-oxohistidine- and kynurenine-containing peptides and identification of their interacting proteins
Date Issued
2015
Date
2015
Author(s)
Liu, Yu-Hsuan
Abstract
活性氧化物質造成的蛋白質氧化常和老化及神經退化疾病作關聯。蛋白質中，能和金屬離子螯合的組胺酸是常見的氧化傷害標的物。而具有顯著發色特性的色胺酸，可經由光游離作用產生自由基，最後造成氧化傷害。近期研究中發現，2-氧基組胺酸與犬尿胺酸分別是組胺酸和色胺酸主要的氧化產物，並且有潛力作為蛋白質氧化受損的生物標記物。但它們的生物物理及生化特性都尚未被透徹了解。
我們發展了能有效地在合成的多肽上產生2-氧基組胺酸和犬尿胺酸的方法。在二價銅離子/抗壞血酸鈉/氧氣的金屬催化氧化系統中，我們調整了試劑的比例與反應的緩衝溶液系統，使產生2-氧基組胺酸的反應產率較文獻報導增加了十倍以上。而藉由孟加拉玫紅為光敏劑的光氧化反應，含色胺酸的多肽被完全氧化，且主要產物為犬尿胺酸多肽。這些方法讓我們能分離出完全氧化的含2-氧基組胺酸短肽與含犬尿胺酸多肽，以鑑定其性質。
組胺酸被氧化成2-氧基組胺酸的結構轉變，使得其在液相層析法的分析中，在碳-18的管柱的滯留時間較長。然而色胺酸的結構轉變，則帶來相反的變化，滯留時間較原先更短。兩者的結構在電噴灑串聯式質譜實驗中展現高度的穩定性。因此針對2-氧基組胺酸和犬尿胺酸做蛋白質體的質譜分析是可行的，我們氧化方法所合成的2-氧基組胺酸和犬尿胺酸多肽可以作為這類質譜實驗的標準品。
為了瞭解2-氧基組胺酸和犬尿胺酸殘基和其他細胞內因子可能的交互作用，我們將合成的多肽接上螢光染料。利用細胞蛋白質體微陣列晶片 ，和我們合成的探針作用，試圖尋找潛在的結合因子。為了後續蛋白質的修復或降解，細胞內可能會有能夠辨識這些氧化殘基的因子，我們的目標就是鑑定這些細胞因子，試圖了解細胞對蛋白質品質調控的機制。
Subjects
2-oxohistidine
kynurenine
reactive oxygen species
metal-catalyzed oxidation
photooxidation
protein microarray
Type
thesis
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Name
ntu-104-R02223213-1.pdf
Size
23.32 KB
Format
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