https://scholars.lib.ntu.edu.tw/handle/123456789/137804
標題: | 以植物細胞培養技術生產重組塵過敏原蛋白Der p2之研究 | 作者: | 李昆達 | 公開日期: | 31-七月-2005 | 出版社: | 臺北市:國立臺灣大學生化科技學系 | 摘要: | 重組過敏原蛋白已在許多不同系統中表現, 而植物系統被認為是具有競爭力的外源蛋白 表現系統。本研究中,從已轉入CaMV 35S 啟動子驅動塵? 過敏原蛋白Dermatophagoides pteronyssinus 2 (Der p 2) 基因的轉殖煙草植株,來誘導癒傷組織與毛狀根,之後分別進行懸浮細 胞培養與毛狀根培養,並利用自行建立之Der p 2 三明治酵素免疫分析法(sandwich-ELISA)進行 定量。從8 株懸浮細胞株中挑選出Der p 2 產量最高的細胞株S3,搖瓶培養16 天,產量為788.3 µg/ L;以生物反應器進行批次培養,產量在第8 天即達515.1 µg/ L。在轉植植株誘導毛狀根方 面,共得24 個細胞株,經30 天三角搖瓶培養後,細胞株R19 產量為475.2 ng/mL。在重組Der p 2 蛋白的抽出與純化方面,重組蛋白粗抽液經硫酸銨沉澱、陽離子交換樹酯SP Sephadex、與 自行建立之Der p 2 單株抗體親合管柱處理後,可以獲得以Der p 2 為主要蛋白之溶液,收率為 19.7 %。 Recombinant allergenic proteins have been produced in a variety of different expression systems. Plants and plant cells are now considered as viable and competitive expression systems for large-scale protein production. In this research, the plantlet of transgenic tobacco contained CaMV 35S promoter chimeric with Dermatophagides pteronyssinus 2 (Der p 2) gene was used to induce formation of callus and hairy roots, and were studied for recombinant Der p 2 production. By Der p 2 sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (sandwich-ELISA), cell line S3 expressed the highest Der p 2 productivity in 8 suspension cell lines. The maximum productivity in flasks was 788.3 µg/L; batch culture in bioreactor reached the highest productivity, 515.1 µg/L. Among 24 cell lines of hairy roots from transgenic tobacco, maximum productivity was 475.2 ng/mL. After the treatment of ammonia sulfate precipitation, cation exchange chromatography, and monoclonal anti-Der p 2 affinity column, recombinant Der p 2 protein was purified into homologous, the recovery rate was 19.7%. |
URI: | http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/10229 | 其他識別: | 932313B002086 | Rights: | 國立臺灣大學生化科技學系 |
顯示於: | 生化科技學系 |
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