https://scholars.lib.ntu.edu.tw/handle/123456789/139497
標題: | 綠竹筍生長與老化機制之探制及相關功能基因之利用─綠竹及綠竹筍老化過程中抗氧化機制之角色及其應用性探討(2/2) | 作者: | 靳宗洛 | 關鍵字: | SOD;native PAGE;活性染色;氧化逆境;重組蛋白;activity stain;oxidative stress;recombinant protein | 公開日期: | 31-七月-2004 | 出版社: | 臺北市:國立臺灣大學植物科學研究所 | 摘要: | 分析綠竹及其竹筍採收後不同部位之SOD 活性及SOD 同功脢鑑定,發現 綠竹筍主要的SOD 活性是由CuZnSOD 及MnSOD 所構成。與過去所分析過的 一百多種植物SOD 同功脢相比較,綠竹筍之CuZnSOD、MnSOD 在Native PAGE 活性染色顯現出極大的差異(Pan et al., 1999),反應出綠竹CuZnSOD 基因其複雜 性,因此推測綠竹筍SOD 同功脢分子結構及生化特性可能具其特異性。 目前的研究己完成了在不同組織、不同生長階段、及採收後老化過程中;以 及利用綠竹筍的懸浮細胞經處理UV-B、強光、高溫、低溫及ABA 等逆境之模 擬過程,來分析綠竹筍SOD 活性及mRNA 的變化情形。 一方面也成功地選殖出四個綠竹的CuZnSOD cDNA 及兩個MnSOD cDNA 全長。但是從Southern blot 結果預估CuZnSOD 可能有四到五個基因,MnSOD 可能有四到五個基因。從MnSOD 3’-end RACE 的結果也顯示有五個不近相同的 3’-end UTR,可能綠竹所擁有CuZnSOD 及MnSOD 基因較其他植物多。 現已在大腸桿菌中大量表現並純化三個GST-CuZnSOD 重組蛋白及兩個 GST-MnSOD 重組蛋白,在Native PAGE 活性染色下,得到不同的活性染色結果, 並將藉由一些生化分析測試,了解其生化特性。 另外也對綠竹CuZnSOD 及MnSOD 的promoter region 進行釣取,以了解 CuZnSOD 或MnSOD 的promoter 是否因為容易受到氧化逆境的誘導,來提高抗 氧化力。 未來這些綠竹的SOD 基因將會被表現在阿拉伯芥中,証明其是否為特定的 CuZnSOD 或是MnSOD 基因。也將假借阿拉伯芥來測試綠竹的這些SOD 基因是 否能推供良好的抗氧化機能。 Activity staining and isozymes identification of SODs in the different part of bamboo shoot and leaf (Bambusa oldhamii) indicated that primary SOD activity in green bamboo shoots was composed of MnSOD and CuZnSOD activities. As compared to SOD isozymes from over one hundred plants, green bamboo’s CuZnSOD and MnSOD showed great difference in native PAGE activity staining. (Pan et al., 1999), reflecting green bamboo’s CuZnSOD gene complexity, therefore inferring possible molecular structures and biochemical activities specificity in green bamboo’s SOD isozymes. We have completed the SODs activity and mRNA gene expression assay by Northern blotting using different tissues from various growth stages of green bamboo and suspension cell treated with UV-B, intensive light, heat, cold and ABA. We show that there are 4 to 5 CuZnSOD and MnSOD genes, respectively according to the Southern blotting data. We cloned 4 different full length CuZnSOD cDNAs and 2 full length MnSOD cDNAs. The 3'-RACE sequence results from MnSOD shows 5 different 3’-UTRs sequences, which is in agreement with the data that green bamboo, has more CuZnSOD and MnSOD gene families. Now we have conducted 3 GST-CuZnSOD and 2 GST-MnSOD recombinant proteins expression in E. coli and acquired different native PAGE activity stain patterns. In the future, we will express these genes in Arabidopsis and analyze these recombinant protein’s biochemical activities in vitro. |
URI: | http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/17466 | 其他識別: | 922317B002014 | Rights: | 國立臺灣大學植物科學研究所 |
顯示於: | 植物科學研究所 |
檔案 | 描述 | 大小 | 格式 | |
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