https://scholars.lib.ntu.edu.tw/handle/123456789/145930
標題: | 建立全長第八因子的表達系統及從第八因子的細胞內運轉過程了解血友病的致病機轉(2/3) | 作者: | 林淑華 | 關鍵字: | 凝血第八因子;哺乳細胞表達系統;A 型血友病的致病的分子機制 | 公開日期: | 2003 | 出版社: | 臺北市:國立臺灣大學醫學院醫學檢驗暨生物技術學系 | 摘要: | A 型血友病是由於病人血液中缺乏第八因子活性所造成,此疾病為性聯遺 傳,在男性發生率約五千到一萬分之一。第八因子由肝臟合成分泌,在血漿中第 八因子濃度非常低(約為100ng/ml),與構造相似的蛋白-第五因子相比低了100 倍。已知無任何細胞株可自然表現此蛋白,而體外細胞培養系統也無法大量合成 第八因子(表現量比其它重組凝血因子蛋白低一百到一千倍),使得第八因子在 生合成及結構功能的相關研究、治療用蛋白的開發,以及基因治療上都受到限 制。為了建立高產量的重組第八因子表達系統及適合活體細胞內觀察方法,以研 究第八因子蛋白在細胞的生合成及運轉過程,故進行下列三方面實驗:一、利用 肝細胞專一之載體pBS-HCRHPI-A 於肝癌細胞株中表達全長之重組第八因子蛋 白。二、以FlAsH- EDT2 染劑進行第八因子蛋白在肝細胞內之活體標定。三、參 照血友病人的基因突變,建構六個點突變第八因子表達質體(突變146、386、 1689、1789、1823 及1942),並合成其重組蛋白,來進行相關研究。本研究目前 已完成所有質體之建構,並以DNA 定序確認;在建立第八因子活體標記系統上, 已完成活體標定染劑FlAsH- EDT2 最適宜濃度及相關染色步驟的測試。在合成突 變第八因子蛋白方面,已完成所表達質體,未來更可結合活體細胞標記法,比較 各突變蛋白在肝細胞內生合成過程及分佈情形,探討各結構功能區之可能功能, 將來可應用於更高效能、更具經濟價值之治療用重組第八因子蛋白之開發。 |
URI: | http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/27773 | 其他識別: | 912314B002184 | Rights: | 國立臺灣大學醫學院醫學檢驗暨生物技術學系 |
顯示於: | 醫學檢驗暨生物技術學系 |
檔案 | 描述 | 大小 | 格式 | |
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