https://scholars.lib.ntu.edu.tw/handle/123456789/163733
標題: | 行政院國家科學委員會專題研究計劃成果報告:PRRS病毒各結構蛋白基因之表現及其抗原性之研究(Ⅱ) | 作者: | 賴秀穗 | 關鍵字: | 豬繁殖與呼吸道症候群;結構蛋白基因 | 公開日期: | 1999 | 出版社: | 臺北市:國立臺灣大學獸醫學系暨研究所 | 摘要: | 豬生殖與呼吸症候群病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV),屬於Arteriviridae,基因體全長15.1 kb 且包含8 個open reading frames(ORFs)。從已知的文獻中可知,ORF5 基因轉譯之蛋白是PRRSV 結構 蛋白中,與中和抗體產生最有關的蛋白。所以本篇論文的主要目的,是針對台灣 分離株FI,利用體外轉譯蛋白當抗原進行免疫及直接DNA 免疫兩種方式,探討 其ORF5 基因轉譯之蛋白是否具有誘發宿主產生中和抗體的能力。抽取台灣分 離株FI 之病毒核酸,利用反轉錄聚合酉每鏈反應(RT-PCR),增幅出621 bp 之 ORF5 基因片段,再將此ORF5 基因片段植入pMT/Bip/V5-HisA 表現載體中, 藉由lipofectin reagent,將此表現質體轉染至Schneider 2 細胞內,進行真核系 統之蛋白質表現,經硫酸銅誘發蛋白質表現(28kDa)後,將此蛋白質表現產物免 疫BALB/c 鼷鼠,結果顯示,雖然能成功地產生28 kDa 之蛋白質產物,但此蛋 白質產物僅能誘發低量的中和抗體產生。此外,進行DNA 免疫時,重新設計引 子並進行反轉錄聚合酉每鏈反應,再將此PCR 產物植入pKAN3224 載體中,選擇 嵌有ORF5 基因之表現質體(pKAN-ORF5),直接以肌肉注射之方式免疫BALB/c 鼷鼠,經中和抗體試驗果顯示,所有實驗組之BALB/c 鼷鼠皆有抗PRRSV 之中 和抗體產生。因此,由實驗結果證明,PRRSV 之ORF5 基因轉譯之蛋白,確實 具有誘發宿主產生中和抗體的能力,且以DNA 免疫的方式較以體外轉譯蛋白進 行免疫方式更能有效地誘發中和抗體反應的產生。 |
URI: | http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/28670 | 其他識別: | 882313B002071 | Rights: | 國立臺灣大學獸醫學系暨研究所 |
顯示於: | 獸醫學系 |
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