Project title
複合蛋白質體網路調控滋養層細胞分化與侵襲的上皮間質轉型過程
Internal ID
NSC96-2314-B002-114
Principal Investigator
Start Date
August 1, 2007
End Date
July 12, 2008
Investigators
Partner Organizations
Project Web Site
Complex Proteomics Network Orchestrates Epithelial-Mesenchymal Transition during Trophoblast Differentiation and Invasion = 複合蛋白質體網路調控滋養層細胞分化與侵襲的上皮間質轉型過程
Description
人類滋養層細胞究竟如何分化成絨毛品系及侵襲性品系細胞，後者再侵入母體蛻膜，至今 瞭解仍有限。而依目前的瞭解，若上皮細胞腫瘤欲獲得局部侵襲的能力，必先失去表皮細胞 的一些特性(如上皮細胞極性或胞間的緊密接觸)，方可獲得侵襲能力，此過程稱之為上皮細 胞間質轉型過程(EMT)，事實上以上描述的過程與滋養層細胞的侵襲有非常多的相似。 在本計劃中，吾人將使用第一周產期絨毛外滋養層細胞的細胞株為研究對象，首先將細胞 養在載玻片上，然後以典型EMT 路徑的誘導因子，如TGF、BMP、EGF、FGF 等或Matrigel， 去嘗試誘導EMT 的表現。這些細胞經過處理48 小時後，再進一步以下列步驟觀察EMT 的 表現是否有發生。 吾人第二步計劃以腺病毒載體導入具本體活性的serine/theorine 之第一至第七型受體(其 為上述誘導因子之受體)，再接著觀察EMT 的表現是否有發生。若以上兩步驟中，卻有可誘 發EMT 的表現的因子或活性受體，則第三步中將細胞株重複以上處理以期發生EMT，但加 入訊息傳導路徑中的特定抑制因子，看是否可以抑制本應出現的EMT，藉此以瞭解此滋養層 細胞的EMT 究竟透過何種訊息傳導路徑而傳遞。而第四步則以載體導入Snail 及Slug 二個 EMT 至重要轉譯因子去大量表達，或植入它們訊息干擾核.酸去抑制Snail 及Slug 的表現， 看是否可以成功調控滋養層細胞的EMT。 本實驗的以上細胞株處理，欲驗證EMT 是否表現，將以如下方法確認。(a) 以共軛焦顯 微鏡看actin 的重新分佈，及上皮細胞的極性是否消失(b) 以免疫螢光及西方墨點法去驗證 Smad2/3 蛋白質是否上升及在核中表現，catenin 及E cadherin 是否有發生向下調控(c) 在 transwell 實驗是否侵襲能力上升(d) 長時間活細胞觀察儀去計算細胞是否運動速度加快(e) 以Metamorph 軟體去客觀定義細胞型態改變。 最後的步驟，如果上述的處理可誘導滋養層細胞的EMT 的發生，則吾人將挑出這些特定 的處理，測定處理前後的蛋白質體變化，再以西方墨點法去重複驗證，冀能找出新的因子可 調控滋養層細胞的EMT 的發生。