花生蔟葉病菌質體RNA聚合酵素SIGMA FACTOR基因之選殖與分析

Abstract

在台灣許多重要病害諸如花生簇葉病，甘藷簇葉病，水稻黃萎病等均為植物菌 質體 (phytoplasmas) 所引起，其原被稱為似菌質體 (mycoplasmalike organisms, MLOs)。長久以來，因植物菌質體均無法成功地被培養出來，且其細胞的純化仍 有許多困難，因此有關其基本生物及生理、生化特性之研究仍屬有限，而有關植 物菌質體之分子生物學之探討更是付之闕如。本研究室近年來除積極從事於利用 核酸探針及單元抗體進行植物病原植物菌質體之偵測工作外，亦已著手探討植物 菌質體之 DNA polymerase, elongation factor, ribosomal RNA 等基因之研究，在 本計畫中將利用PCR 增幅方式，從事RNA 聚合酵素Sigma factor 基因片段之選 殖，以獲得花生簇葉病菌質體Sigma factor 基因篩選用之探針，從建立於 lambda 噬菌體之甘藷簇葉病菌質體基因庫篩選出攜帶RNA 聚合酵素Sigma factor 基因 之選殖株，其後利用生體內剪接作用製備出質體選殖株，再從事南方氏漬染，北 方漬染，核甘酸定序、分析及引子伸展反應等一系列之測驗，以完成對花生簇葉 病菌質體Sigma factor 基因之探討，本計畫將於二年完成，本年度為第二年執行， 於1998/ 8 月迄今已完成花生簇葉病菌質體DNA 之純化、基因庫之構築、利用 PCR 增幅方式研製花生簇葉病菌質體Sigma factor 篩選用核酸探針，並完成該探 針之選殖、核酸解序及比對、探針標識等工作。