張紹光臺灣大學:獸醫學研究所孫友梅Sun, Yu-MeiYu-MeiSun2010-05-042018-07-092010-05-042018-07-092008U0001-2907200811174200http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/178918　　本實驗的目的為比較人類病患、伴侶動物與經濟動物所分離之綠膿桿菌在抗生素敏感性及數種抗藥性基因型的表現。試驗期間，由人類病患分得94株、家犬分得29株以及雞中止蛋分得97株，共220株綠膿桿菌；經確認之菌株分別進行抗生素敏感性試驗、脈衝式電泳及利用聚合酶鏈鎖反應偵測Ambler class A（blaTEM、blaSHV、blaGES、blaVEB、blaPER、blaPSE）與Ambler class D（blaOXA-2 like、blaOXA-10 like）之乙內醯胺酶。　抗生素敏感性試驗結果顯示，所選用之盤尼西林類、頭孢子素類、胺基醣苷類與氟奎諾酮類抗菌劑中，人類病患分離株之抗藥性皆最嚴重，家犬次之，中止蛋最低；對所偵測的抗藥性基因而言，TEM-1在人類、家犬、雞蛋分離株之陽性率分別為90.4%、69.0%與71.1%，PSE-1之陽性率分別77.7%、75.9%與6.2%，OXA-10 like之陽性率則為98.9%、86.2%與18.6%，而乙內醯胺酶SHV、GES、VEB、PER及OXA-2 like皆未在本實驗中被偵測出。經定序後，發現OXA-17及OXA-10兩者為人類與家犬菌株最常及次之常見之OXA酵素；然而，中止蛋分離株所攜帶之OXA-10之陽性率則與OXA-17相近。以65%基因同源性為分類基礎，脈衝式電泳圖譜可將所有收集菌株分成20個clusters，雖然部份之人類與中止蛋分離株似乎有集中在幾個特定clusters之趨勢，但基於綠膿桿菌基因之多變異性，大部分菌株仍分散在不同之clusters。　綜合實驗結果，發現TEM-1、PSE-1與OXA類乙內醯胺酶均廣泛存在於所收集之綠膿桿菌中，人類分離菌株不論在選定藥物之抗藥性或乙內醯胺酶抗藥性基因之陽性率皆高於動物來源之菌株；基於動物與人類因使用不同種類抗菌劑，而對於綠膿桿菌產生不同篩選性壓力的事實，因此，未來擬由探討常用抗菌劑的使用對誘導綠膿桿菌產生抗藥性之關連性，或抗藥性綠膿桿菌在人類與動物之間傳播的可能模式作為進一步研究的方向。The aims of the study were to survey and differentiate the phenotype and genotype of Pseudomonas aeruginosa from human, companion and economic animal isolates. A total of ninety four human isolates, twenty nine canines isolates and ninety seven chicken isolates used polymerase chain reaction (PCR) to detect the encoding genes of class A (blaTEM, blaSHV, blaGES, blaVEB, blaPER and blaPSE) and class D (blaOXA-2 like, and blaOXA-10 like) β-lactamases. All isolates were also performed antimicrobial susceptibility testing and pulsed-fielded gel electrophoresis (PFGE). Antimicrobial resistance of human isolates were higher than canine isolates, followed by chicken isolates. blaTEM, blaSHV, blaGES, blaVEB, blaPER ,and blaOXA-2 like were not harboured in any isolates. In human, canine and chicken isolates, blaTEM-1 (90.4%, 69.0% and 71.1%), blaPSE-1 (77.7%, 75.9% and 6.2%) and blaOXA-10 like (98.9%, 86.2% and 18.6%) were detected, respectively. OXA-17 was the most common OXA enzyme in human and canine isolates, followed by OXA-10. However, the results of the prevalence of OXA-10 and OXA-17 in chicken isolates were similar (9.3% and 8.2%). All isolates were grouped into twenty clusters by PFGE. Although some isolates from humans or chickens tended to be gathered in specific clusters, other isolates from three sources were mixed together and the result indicated that genetypes of P. aeruginosa are divergent. TEM-1, PSE-1 and OXA-type β-lactamases were widely distributed in Taiwan. The usage of antimicrobial agents and antimicrobial selective pressure might cause great impact on the results. Further surveillance and monitoring the route of resistant genes transmission between P. aeruginosa from difference species and the correlation between antimicrobials and resistant bacteria will be necessary.口試委員會審定書 I謝 II文摘要 III文摘要 IV一章　緒言 1二章 文獻探討 3第一節 綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginonsa） 3　1.1綠膿桿菌之型態學與生化特性 3　1.2綠膿桿菌之毒力因子與病原性 4第二節 綠膿桿菌之抗藥性機制 7　2.0總論 7　2.1盤尼西林類抗菌劑 7　2.2頭孢子素類抗菌劑 8　2.3多黏菌素 8　2.4胺基醣苷類抗菌劑 9　2.5氟奎諾酮類抗菌劑 9　2.6綠膿桿菌之抗藥性機制 9　2.6.1酶的修飾或破壞抗菌劑 10　2.6.2改變或更替抗菌劑作用標的 10　2.6.3改變細胞膜之通透性 10　2.6.4主動排出幫浦 11第三節 乙內醯胺酶 13　3.1乙內醯胺酶之分類法 13　3.1.1 Ambler分類法 13　3.1.2 Bush分類法 13　3.2綠膿桿菌之乙內醯胺酶 15　3.3乙內醯胺酶之鑑定 17第四節 全球具抗藥性綠膿桿菌之分佈趨勢 20三章 材料與方法 23第一節 實驗材料 23　1.1培養基與試劑 23　1.1.1培養基 23　1.1.2試劑 23　1.1.3抗菌劑與其它藥品 23　1.1.4 DNA模版萃取用之藥品與相關溶液配製 23　1.1.5聚合酶鏈鎖反應及電泳之藥品與相關溶液 24　1.1.6脈衝式電泳之藥品與相關溶液配製 24　1.2器具 25　1.3儀器設備 25第二節 實驗方法 26　2.1菌株之收集與鑑定 26　2.2抗生素敏感性試驗 26　2.3綠膿桿菌DNA模版之萃取 27　2.4聚合酶鏈鎖反應 28　2.4.1綠膿桿菌之鑑定 28　2.4.2菌株抗藥性基因之偵測 29　2.5脈衝式電泳試驗 29　2.5.1製備plug 29　2.5.2脈衝式電泳 30第三節 統計與分析 31四章 結果 32第一節 菌株收集 32第二節 抗生素敏感性試驗結果 33第三節 乙內醯胺酶基因之偵側結果 35第四節 脈衝式電泳之分子分型 37五章 討論 39第一節 綠膿桿菌之抗藥性比較 39第二節 台灣綠膿桿菌分離株所攜乙內醯胺酶之分佈 43第三節 綠膿桿菌之分子流行病學 47六章 總結 49考文獻 64一 人類來源分離株與標準菌株（ATCC 27853）之親緣性分析 60二 家犬來源分離株與標準菌株（ATCC 27853）之親緣性分析 61三 雞中止蛋分離株與標準菌株（ATCC 27853）之親緣性分析 62四 220株綠膿桿菌分離株與標準菌株（ATCC 27853）之親緣性分析與分組圖 63一 綠膿桿菌對各抗菌劑之臨界點數值 51二 聚合酶鏈鎖反應使用之引子對、黏合反應溫度與產物長度 52三 人類綠膿桿菌分離株之抗生素敏感性試驗結果 53四 家犬綠膿桿菌分離株之抗生素敏感性試驗結果 54五 雞中止蛋綠膿桿菌分離株之抗生素敏感性試驗結果 55六 三種來源菌株對不同抗菌劑敏感性之比較 56七 綠膿桿菌乙內醯胺酶的鑑定及分佈表 57八 脈衝式電泳分析：三種來源分離株之親緣性分佈對照表 58九 本試驗與它國分離株對不同抗菌劑敏感性百分率之比較表 59application/pdf815298 bytesapplication/pdfen-US綠膿桿菌抗生素敏感性試驗脈衝式電泳家犬家禽P. aeruginosaantimicrobial susceptibility testingPFGETEMOXAcanineavianthesishttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/178918/1/ntu-97-R95629039-1.pdf