齊肖琪YU-CHI WU2025-10-032025-10-032008https://doi.org/10.6342%2fNTU.2008.02749https://scholars.lib.ntu.edu.tw/handle/123456789/732614從神經壞死症病毒 (nervous necrosis virus, NNV) 感染後存活下來之金目鱸腦組織建立的BB細胞株有NNV持續性感染。為了釐清干擾素 (interferon, IFN) 是否在BB細胞株NNV持續性感染的機制中扮演一個角色，以NNV專一性兔子抗血清處理BB細胞五代後，得到一株無病毒的負對照組細胞，在治療的BB細胞 (cured BB, cBB) 中皆測不到NNV的力價、RNA及capsid protein。第一型IFN可誘發Mx抗病毒 蛋白，在BB細胞及NNV感染的cBB細胞中發現有Mx基因的表現，但在無NNV感染的cBB細胞中則否。以單源抗體中和過的BB細胞上清液，處理cBB細胞後，可誘發Mx基因的表現，及抗NNV之抗病毒活性。以低病毒感染劑量 (multiplicity of infection, MOI) (≦1) 感染cBB細胞後，可再誘發cBB細胞形成NNV持續性感染。從以上這些實驗結果得知，BB細胞上清液存在類IFN的細胞激素；又IFN誘發的抗病毒反應，在保護大部分細胞免於病毒爆破性感染，及調節BB細胞株NNV持續性感染機制中扮演了一個重要的角色。 以RACE (rapid amplification of cDNA ends) PCR方法放大金目鱸腦細胞株cBB的Mx mRNA，得到金目鱸Mx基因的全長cDNA (2.2 kb)包含一個長度為1875個核苷酸的open reading frame (ORF)，可轉譯出一個624個氨基酸之Mx蛋白，預測分子量為71.4 kDa，且在氨基端含有一tripartite guanosinetriphosphate (GTP)-binding motif，以及在羧基端含有一leucine zipper，具有全部已知的Mx蛋白之特性。在cBB細胞中，poly I:C的轉染會誘發Mx基因的表現；在28 ℃的誘發量會高於20 ℃的誘發量；且魚類結病毒、雙股RNA病毒及虹彩病毒的感染也會誘發Mx基因的表現，但結病毒比其他兩種病毒誘發Mx基因表現量高。利用抗病毒活性測試，發現poly I:C轉染的cBB細胞，對魚類結病毒及雙股RNA病毒具有抗病毒活性，但對虹彩病毒則沒有抗病毒活性；以siRNA抑制Mx基因的表現後，可恢復結病毒及雙股RNA病毒的複製量，這些結果顯示，金目鱸Mx基因的表現具有抑制魚類結病毒及雙股RNA病毒增殖的功能。 在NNV感染cBB細胞24小時內，NNV RNA-dependent RNA polymerase (RdRp)的表現量會先增加，當金目鱸Mx蛋白在感染後24小時表現時，NNV RdRp的量即減少；以siRNA抑制cBB細胞中金目鱸Mx蛋白的表現後，NNV RdRp、capsid protein、RNA2以及子代病毒力價皆會上升；以免疫螢光染色法在NNV感染的cBB細胞中，發現金目鱸Mx蛋白會與NNV RdRp共同座落在細胞核周圍的區域；在共同免疫沈澱法分析中，發現金目鱸Mx蛋白不僅會與NNV RdRp共同沈澱下來，也會與NNV capsid protein共同沈澱，且金目鱸Mx蛋白與NNV RdRp之複合物會與lysosomes共同座落在一起，隨後NNV RdRp會被lysosome系統所分解，因此顯示金目鱸Mx蛋白是藉由隔離NNV RdRp於細胞核周圍的區域，接著在lysosome中被分解的機制來抑制NNV RNA的合成。en魚類結病毒干擾素持續性感染fish nodavirusinterferonMx proteinMx蛋白persistent infectiondoctoral thesis