朱瑞民2006-07-262018-07-092006-07-262018-07-092005http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/28734Canine transmissible venereal tumor (CTVT) has low levels of MHC molecules on the cell surface. CTVT spontaneously regresses after a 4-6 months of growth. CTVT cells secrete high concentrations of TGF-f3 during tumor growth. TGF-f3 inhibits NK cell cytotoxicity. However, CTVT undergoes regression when TGF-f3 concentration remains high because tumor infiltrating lymphocytes (TIL) produce large amounts of IL-6. IL-6 is a strong TGF-f3 antagonist and is one of the key substances that restore NK cell cytotoxicity against CTVT cells. Based on these findings, we devised and tested a new immuno-gene therapy strategy that uses both IL-6 and IL-15. IL-6 antagonized the inhibitory effect of TGF-f3 on NK cell cytotoxicity. In a cell culture system, we evaluated the role of NK cells in tumor regression and the ability of IL-6 and IL- 15 to restore TGF-f3-inhibited NK cell cytotoxicity. Only the treatment using both IL-6 and IL-iS effectively relieved the inhibitory effect of TGF-f3 and activated NK cell cytotoxicity. The IL-6 and IL- 15 only treatments did not increase, or only slightly increased, NK cell cytotoxicity. Electroporation of IL-6 and IL-iS plasmids into BALB/c mice increased the ratio of NK cells in the spleen and promoted splenocyte NK cell cytotoxicity. The IL-6 and IL-15 only treatments did not significantly change the NK cell ratio or the cytotoxicity of NK cells. However, in the IL-iS treatment, there was a slight elevation of NK cell ratio. In CB17/SCID mice, electroporation with both IL-6 and IL-iS plasmids strongly inhibited the growth and establishment of CTVT. IL-6 or IL-iS alone had no effect. In CB17/SCID mice treated with anti-asialo GM-i antibody, which blocks NK cell function, combined electroporation with IL-6 and IL-15 was unable to suppress CTVT growth. Thus, NK cells play a key role in suppressing tumors with low MHC expression and high TGF-13 secretion. Gene therapy using both IL-6 and IL-15 effectively suppressed the growth and establishment of the tumor.犬傳染性花柳性腫瘤（Can 1 ne transmissible venereal tumor , CTVT ）的細胞表面僅能表現極少量的MHC ( 1 ) , CTVT 在生長期及消退 期會分泌大量的TGF 一尸。TGF 一尸確具有使MHCI 和H 不表現以及抑 制NK 細胞活性的特性，但在消退期中，TGF 一尸存在下的腫瘤仍能逕 行消退的原因是，此時期之腫瘤浸潤淋巴球（Tumor infi ltrating lymphocytes , TILs ）會分泌大量的IL 一6 0 IL 一6 已知能恢復被TGF - 尸所抑制之NK 細胞的毒殺作用（2 ）。在CTVT 之TILs 中，有高達85 ％以上為疑似NK 細胞的非T 非B 淋巴球，而IL 一15 在NK 細胞之活化 上又扮演著重要的角色。基於以上的發現，本實．驗先構築IL 一6 與 IL 一15 兩個質體，並確定其可分泌具生物活性的IL 一6 與IL 一15 。再設 計一複合式的基因療法，以肌肉活體基因電衝的方式，將IL 一6 及 IL 一15 基因導入帶有CTVT 腫瘤之C . B 一17 SCID micc 體內，以觀察其 對CTVT 生長之影響與提升小鼠之存活率。上述之實．驗設計主要希望 藉由細胞 IL 一6 解除TGF 一尸對NK 活性的抑制，再進一步以IL 一15 活化NK 以達到消退腫瘤的目的。除了活體實．驗外，本研究同時以細胞 培春的方式，探討TGF 一尸對於小鼠脾臟細胞之NK 活性抑制效應，以 及IL 一6 和IL 一15 二者對於TGF 一尸所抑制之NK 活性之回復作用，配合複合式免疫療法的效果，探討NK 細胞在此MHC 低表現，且產生TGF - 尸的腫瘤中所扮演的角色。在細胞培春實．驗中，我們證實了IL 一6 和 IL - - 15 合併使用時，能有效的解除TGF 一尸對於NK 細胞的活性抑制能 力。更進一步在NK 細胞毒殺實．驗中，發現單核細胞也會增強NK 細胞 的毒殺作用。對於在BALB / c 小鼠中我們成功的以IL 一6 和IL 一15 質體 在小鼠體內製造具功能的IL 一6 和IL 一15 。合併使用IL 一6 和IL 一15 質 體可使小鼠脾臟中的NK 細胞數目上升，且增加NK 細胞毒殺能力。單 獨使用IL 一15 質體之小鼠則NK 細胞毒殺能力稍有提升，但NK 細胞之 數目則和IL 一6 及Vcctor 處理組相同;而IL 一6 質體則對於NK 細胞之 數目及毒殺能力均無影響。IL 一6 及IL 一15 合併使用對於CTVT 的形成 ( Establishmcnt ）有明顯的抑制效果，且能顯著的延緩已形成 ( Established ）之CTVT 腫瘤的生長。單獨使用IL 一6 或IL 一15 質體 者則對於CTVT 腫瘤之消退沒有影響。給予Anti 一as 1 aloG 降1 抗體阻 斷C . B 一17 SCID 小鼠之NK 細胞功能時，IL 一6 及IL 一15 質體便無法發 揮功用使腫瘤消退。上述結果證實了NK 細胞在此複合式療法中扮演 了對抗CTVT 的主要角色。application/pdf6640555 bytesapplication/pdfzh-TW國立臺灣大學獸醫學系暨研究所Anti-asialo GM-i AbCTVT IL-6IL-i5NK cellsreporthttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/28734/1/932313B002021.pdf