劉春櫻臺灣大學：化學研究所宋易瑾Sung, Yi-ChinYi-ChinSung2007-11-262018-07-102007-11-262018-07-102005http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/51763I 本研究以9-乙基腺嘌呤(9-ethyladenine)與tri-O-acetyladenosine 為分 子模版，用於製備整體式分子烙印聚合物管柱。其製備方法為將分子模 版、單體、交聯劑與progen 的混合溶液導入預先以γ-MPS 矽烷化之內 徑75 µm 毛細管，在聚合起始劑催化下聚合，接著利用針筒通入甲醇與 醋酸之混合溶液萃取分子模版。將所製備的管柱分別應用於核苷酸鹼 基、核苷以及核苷酸混合物的分離。對於核苷酸鹼基，在不同pH 值(4~9) 磷酸緩衝溶液，其滯留順序為cytosine > thymine > guanine > adenine，結 果顯示孔洞對adenine 有較強的滯留力，guanine 次之，thymine 與cytosine 較無明顯的滯留。核苷酸鹼基混合物最佳化分離條件為分離電壓15 kV，磷酸緩衝溶液(10 mM, pH 4)，相同管柱連續注入4 次其滯留時間的 RSD 值< 4% ，平均理論板數為3165 m-1。繼而應用於核苷混合物的分 離，在pH 值(7~8)時，核苷所帶的有效電荷接近，故adenosine 滯留較 顯著。核苷混合物最佳化分離條件為分離電壓15 kV，磷酸緩衝溶液(10 mM, pH 8)，相同管柱連續注入4 次其滯留時間RSD 值< 2.5%，平均理 論板數12169 m-1。對於核苷酸混合物，在磷酸緩衝溶液pH 值(3~5)時， 其滯留順序與有效電荷順序ㄧ致，得知AMP 並無特殊滯留，故本研究 進而以tri-O-acetyladenosine 為分子模版，在10 mM、pH 8 之磷酸緩衝 溶液AMP 有明顯滯留，但同為嘌呤類鹼基之GMP 其滯留力較弱，其最 II 佳分離條件pH 8、10 mM 之磷酸緩衝溶液，分離電壓為-25 kV，相同管 柱連續注入4 次其滯留時間RSD 值< 3.5 %，平均理論板數5039 m-1。 利用上述所建立系統為探討其複雜基質樣品的可行性，本研究選用主要 成份為多醣體並含少量核苷酸鹼基及核苷的市售靈芝膠囊作分析，以 9-ethyladenine 為分子模版所製備管柱，在硼酸緩衝溶液(10 mM, pH 9) 電壓15 kV 的環境下，成功的分離靈芝內的uracil、uridine 與adenosine， 其滯留順序為uracil > uridine > adenosine。摘要……………………………………………………………………..Ⅰ 目錄……………………………………………………………………..Ⅲ 圗目錄…………………………………………………………………..Ⅷ 表目錄………………………………………………………………....X 第一章 序論…………………………………………………………....1 第一節 分子烙印聚合物…………………………………………..1 1.1 簡介……………………………………………………….1 1.2 分子烙印聚合物之應用………………………………….2 1.3 毛細管電層析管柱種類………………………………….2 1.3.1 填充式管柱……………………………………………..3 1.3.2 整體式管柱……………………………………………. 7 1.3.3 開管式管柱……………………………………………..8 1.5 以腺嘌呤衍生物為分子模板應用於分子烙印聚合物...10 1.6 研究動機………………………………………………...12 第二節 毛細管電層析簡介………………………………………14 2.1 前言……………………………………………………...14 2.2 毛細管電層析原理……………………………………...15 2.3 毛細管電層析管柱種類介紹…………………………...18 2.3.1 填充式管柱…………………………………………..19 2.3.2 開管式毛細管電層析………………………………..20 2.3.3 整體式毛細管電層析………………………………..21 1. 水溶性單體與分散法製備聚合物………………….21 2. 有機多孔性聚合物………………………………….22 (1) Acrylamide-based monoliths……………………….22 (2) Polystyrene-based monolithic capillary columns…..23 (3) Methacrylate ester-based monolithic columns……..24 第三節 分析物介紹……………………………………………..25 3.1 核酸…………………………………………………….25 3.1.1 核甘酸鹼基…………………………………………26 3.1.2 核苷…………………………………………………26 3.1.3 核苷酸………………………………………………27 3.2 靈芝…………………………………………………….27 第二章 實驗部份……………………………………………………..34 第一節 儀器部分…………………………………………………34 第二節 藥品部分…………………………………………………37 第三節 分子模板的合成與鑑定…………………………………39 3.1 分子模板的合成………………………………………...39 3.1.1 9-乙基腺嘌呤分子模板之合成………………………39 3.1.2 tri-O-acetyladenosine分子模版之合成….....................39 3.2 分子模板性質的鑑定.....................................................40 3.2.1 核磁共振光譜鑑定......................................................40 第四節 毛細管靜相製備與鑑定..................................................41 4.1 毛細管內部表面前處理................................................41 4.2 毛細管內壁表面矽烷基衍生化.................................. 41 4.3 毛細管內聚合反應...................................................... 41 4.3.1 9-乙基腺嘌呤分子模板之聚合……………………41 4.3.2 tri-O-acetyladenosine分子模版之聚合…................42 第五節 毛細管電層析的操作....................................................43 5.1 藥品製備.....................................................................43 5.2 毛細管電層析操作條件.............................................44 第三章 結果與討論..............................................................................48 第一節 分子模版之製備與鑑定....................................................48 1.1 分子模版之製備...............................................................48 1.1.1 9-乙基腺嘌呤之合成..................................................48 1.1.2 Tri-O-acetyladenosine..................................................49 1.2 分子模版之鑑定...............................................................49 第二節 毛細管製備與鑑定............................................................53 2.1 毛細管內部前處理...........................................................53 2.2 毛細管內部矽烷基衍生化...............................................53 2.3 毛細管內靜相聚合物的製備...........................................54 2.3.1 以9-乙基腺嘌呤為分子模板製備整體式管柱..........54 2.3.2 以tri-O-acetyladenosine為分子模板製備整體式 . 管柱..............................................................................56 2.4 毛細管電滲流測試..........................................................57 2.5 掃描式電子顯微鏡鑑定..................................................58 第三節 毛細管電層析之分析應用……………………………..65 3.1 核苷酸鹼基之分離…………………………………….65 3.2 核苷之分離…………………………………………….69 3.3 核苷酸之分離………………………………………….76 3.4 真實樣品之分析……………………………………….80 第四章 結論…………………………………………………………113 參考文獻………………………………………………………………1154812627 bytesapplication/pdfen-US分子烙印聚合物molecularly imprinted polymerthesishttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/51763/1/ntu-94-R92223039-1.pdf