盧虎生臺灣大學：農藝學研究所林家玉LIN, Chiu-YuChiu-YuLIN2007-11-282018-07-112007-11-282018-07-112006http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/59108開發優質高產的藥用真菌，是本研究的目標。本論文選用3個藥用真菌品種，分別是Antrodia xantha，Fomitopsis pinicola （Swartz. Fr.） Karst.，Rigidoporus ulmarius（sow.:Fr） Imaz. （選用3個品系，分別是TFRI 1047，MG TFRI 1047，MG TFRI 1058），在培養35天後，其中在菌絲體乾重的產率方面，MG TFRI 1058可以達到15.17 g/l的產量；在多醣體產量方面，TFRI 1047可以達到197 mg/l的產量；在乙醇萃取物方面，MG TFRI 1058可以達到6.2 mg/l的產量。在生物活性方面，MTT細胞毒性結果顯示，在1000 μg/ml 的濃度下，以上5個菌種的菌絲多醣體及乙醇萃取物都不具有生物毒性。於外加interferon-γ於人類靜脈內皮細胞 (human vascular endothelial cell, ECV cell)，以引起細胞之發炎反應，及促使細胞中IP-10蛋白之表現後，再加入菌絲萃取物後觀察其抑制IP-10蛋白及其啟動子表現的情形，以測定是否有抗發炎的能力。結果顯示，在多醣體方面，Antrodia xantha，Rigidoporus ulmarius都具有抑制IP-10蛋白質釋出的能力，其中又以Rigidoporus ulmarius中的MG TFRI 1047，在1 μg/ml 的濃度處理下，降低67 %的IP-10蛋白質釋出為最佳；在乙醇萃取物方面，Antrodia xantha，Fomitopsis pinicola，Rigidoporus ulmarius中品系MG TFRI 1047和MG TFRI 1058都具有抑制IP-10蛋白質釋出的能力，其中又以Fomitopsis pinicola，在100 μg/ml 的濃度處理下，可以降低58 %的IP-10蛋白質表現，及MG TFRI 1058，在100 μg/ml 的濃度處理下，可以降低90 %的IP-10蛋白質表現具有較好的表現。 在本論文的結論中，我認為多醣在抗發炎上的能力上是所有萃取物中較好的，其中又以Rigidoporus ulmarius中的MG TFRI 1047是未來最有發展性的菌種，因為此菌種不論是在產量上或是抗發炎活性上都具有最好的表現。目錄 致謝 1 目錄 2 縮寫字全名對照 5 中文摘要 7 英文摘要 9 圖表目錄 11 緒論 16 前人研究 19 1. 菌種介紹 19 1.1. Antrodia xantha 黃白薄孔菌 19 1.1.1. 分類地位……………………………………...……19 1.1.2. 型態與分佈…………………………………...……19 1.2. Fomitopsis pinicola 松生擬層孔菌 20 1.2.1. 分類地位…………………………………………...20 1.2.2. 型態與分佈………………………………………...20 1.3. Rigidoporus ulmaeius榆硬孔菌…………….……….21 1.3.1. 分類地位…………………………………………...21 1.3.2. 型態與分佈…………………………………….…..21 2. 藥理生物活性…………………………………………....22 材料與方法 23 1. 材料 23 1.1. 菌株 23 2. 方法 24 2.1. 培養基之配製方法 24 2.2. 菌絲培養方法 24 2.3. 生長曲線之測定 25 2.4. 菌絲體萃取物之製備 25 2.5. 多醣體分子量分佈分析 26 2.6. 乙醇萃取物中adenosine、inosine及thymidine成分之定量………………………………………………………………..27 2.7. dehydrosulphurenic acid、15a-acetyl-dehydro sulphurenic acid及dehydroeburicoic acid成分之定量…….……29 2.8. 水解及單醣的組成分析 30 2.9. 細胞培養方法 32 2.10. MTT分析 32 2.11. Transfection IP-10分析 33 2.12. IP-10 protein ELISA test……………………………..34 結果 36 1. 生長曲線 36 2. 菌絲乾重產率及多醣體含量比較 43 3. 多醣體分子量分析及多醣體單醣組成分析 47 4. 乙醇萃取物中ADENOSINE，INOSINE及THYMIDINE成分之定量……………………………………………………………………..61 5. 三萜類DEHYDROSULPHURENIC ACID、15a-ACETYL-DEHYDRO SULPHURENIC ACID及DEHYDROEBURICOIC ACID成分之定量與比較.71 7. 多醣體對ECV細胞的毒殺能力分析 79 8. 多醣體對ECV細胞內的IP-10蛋白質表現影響 90 8.1 Transfection IP-10分析………………….………. .90 8.2 IP-10 protein ELISA test…………….……………101 討論 112 結論 115 參考文獻 11712407516 bytesapplication/pdfen-US抗發炎Antrodia xanthaFomitopsis pinicolaRigidoporus ulmariusthesishttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/59108/1/ntu-95-R93621115-1.pdf