指導教授：薛景中臺灣大學：材料科學與工程學研究所郭育廷Kuo, Yu-TingYu-TingKuo2014-11-262018-06-282014-11-262018-06-282014http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/262061隨著醫學的發展與需求，細胞於人造表面的貼附生長行為研究也愈來愈受到重視，而細胞貼附行為更是許多細胞行為的基礎，如細胞的能動性、生長與分裂。而人造表面的表面性質則是影響細胞貼附行為的重要因素之一。相較於其他常用於細胞研究的人造表面，如聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、纖維，自組裝單層膜 (SAMs) 能更精準的調控表面組成，進而調控表面性質。 為了提高表面改質的彈性，本研究採用兩種官能基混合修飾的玻璃基材的自組裝單層膜系統。選用的自組裝單層膜分子為3-氨基丙三甲羥矽烷和3-巰基丙基-三甲羥矽烷。在pH 7.4的環境下，將兩種分子以不同比例混合修飾玻璃表面，能得到一系列表面電位介於24 mV和-155 mV之間的表面，並以此探討表面電位對於細胞行為的影響。 研究中使用X光光電子光譜儀 (XPS) 量測自組裝單層膜表面的化學組成，並由文獻得知其表面電位。另外以光學顯微鏡、螢光顯微鏡以及掃描式電子顯微鏡觀察小鼠胚胎纖維細胞株NIH3T3在各個混合比例的自組裝單層膜上的貼附與生長行為，包含貼附量、生長量、生長速率以及細胞形貌。研究發現，由於細胞表面整體帶負電性，基材表面上NH2官能基比例愈多，表面電位愈正，細胞的貼附量較多，細胞形狀較健康；反之，基材表面上NH2官能基比例愈少，表面電位愈負，細胞的貼附量較少，細胞生長情況較差。而生長速率則主要受接觸抑制特性影響，表面電位對其影響不大。With the development of medicine, cell behaviors on artificial surface have gained attention among researchers. Cell adhesion is central to many cell behaviors including motility, survival and differentiation. Surface properties of artificial surface are known to be one of the key factors in cell adhesion. Compared with other artificial surface usually used in cell research such as polystyrene, PMMA, and fiber, self-assembled monolayers are known for its excellent ability to modify surface. To acquire better control of surface properties, mixed functional groups of silanes are introduced to glass surface. In this study, different ratio of 3-aminopropyltrimethoxysilane and 3-mercaptopropyltrimethoxysilane are applied to glass substrate, surfaces with a series of zeta potentials from +24 to -155 mV at pH 7.4 are obtained. The surface chemical composition of binary SAMs is quantified using x-ray photoelectron spectroscopy, while that of zeta potential can be found in reference. NIH3T3 cells are chosen to culture on these binary-SAM modified glass and incubated for several different time periods. The population density, proliferation rate and shape of cells adhered on surfaces of various potentials are examined using optical microscope, fluorescence microscope and scanning electron microscope. The results showed that surface with higher positive potential promotes cell adhesion and proliferation. On the contrary, more negative the zeta potential is, worse the cells adhere and grow. And zeta potential have little effect on proliferation rate.目錄 審定書………………………………………………………………Ⅰ 致謝……………………………………………………………………Ⅱ 摘要……………………………………………………………………Ⅳ Abstract………………………………………………………………Ⅴ 目錄……………………………………………………………………Ⅶ 圖目錄…………………………………………………………………Ⅸ 表目錄………………………………………………………………XI 第一章 緒論……………………………………………………………1 第二章 文獻回顧………………………………………………………3 2.1. 細胞貼附生長與人工表面……………………………………………………3 2.1.1. 細胞外基質與細胞貼附生長…………………………………………3 2.1.2. 常見人造表面…………………………………………………………4 2.1.3. ECM對細胞貼附生長的影響………………………………………5 2.2. 自組裝單層膜 (SAMs) 簡介………………………………………………7 2.3. 自組裝單層膜 (SAMs) 應用………………………………………………9 2.3.1. 靜電吸附………………………………………………………………9 2.3.2. 選擇性沉積……………………………………………………………9 2.3.3. 選擇性靜電吸附……………………………………………………10 2.4. 以SAMs研究細胞貼附行為………………………………………………11 2.5. 二元自組裝單層膜…………………………………………………………14 2.5.1. SAMs之成長速度與機制…………………………………………14 2.5.2. SAMs的均勻度……………………………………………………16 2.5.3. 調控表面電位與偶極………………………………………………17 2.6. 二元自組裝單層膜與生物系統之交互作用………………………………20 第三章 實驗……………………………………………………………23 3.1. 實驗藥品……………………………………………………………………23 3.1.1. 試片製備…………………………………………………………23 3.1.2. 細胞培養……………………………………………………………23 3.1.3. 細胞染色……………………………………………………………23 3.1.4. 細胞固定……………………………………………………………24 3.2. 儀器簡介及原理……………………………………………………………25 3.2.1. X光光電子光譜儀 (X-ray Photoelectron Spectroscopy, XPS) ……25 3.2.2. 倒立螢光顯微鏡……………………………………………………25 3.2.3. 超臨界流體乾燥機…………………………………………………26 3.2.4. 掃描式電子顯微鏡…………………………………………………26 3.3. 實驗步驟……………………………………………………………………28 3.3.1. 二元自組裝單層膜製備……………………………………………28 3.3.2. 表面官能基比例測定………………………………………………28 3.3.3. 細胞培養……………………………………………………………28 3.3.4. 細胞染色……………………………………………………………29 3.3.4.1. 細胞膜螢光染劑純化…………………………………………29 3.3.4.2. 細胞染色………………………………………………………29 3.3.5. 細胞固定術、超臨界流體乾燥與電子顯微鏡影像拍攝……………29 第四章　結果討論……………………………………………………31 4.1. 表面官能基比例……………………………………………………………31 4.2. 表面電位對細胞貼附、生長的影響………………………………………32 4.2.1. 表面電位對細胞貼附量的影響…………………………………32 4.2.2. 表面電位對細胞生長的影響………………………………………33 4.2.3. 細胞密度對細胞貼附、生長的影響………………………………35 4.3. 表面電位對細胞形貌的影響………………………………………………38 4.3.1. 以光學顯微鏡觀察表面電位對細胞形貌造成的影響……………38 4.3.2. 以螢光顯微鏡觀察表面電位對細胞形貌的影響…………………41 4.3.3. 以掃描式電子顯微鏡觀察表面電位對細胞形貌的影響…………45 第五章　結論…………………………………………………………52 第六章　參考文獻……………………………………………………536139014 bytesapplication/pdf論文公開時間：2014/08/21論文使用權限：同意無償授權細胞貼附細胞生長自組裝單層膜混合官能基表面電位thesishttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/262061/1/ntu-103-R01527011-1.pdf