指導教授：吳嘉文臺灣大學：化學工程學研究所王毓璞Wang, Yu-PuYu-PuWang2014-11-252018-06-282014-11-252018-06-282014http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/261188　　本研究的目的是將具有高生物相容性和表面修飾官能基的有機海藻酸與各種功能性的無機奈米粒子（包含氫氧基磷灰石、氧化鐵、硼酸鈣和類沸石咪唑骨架材料）結合，應用於生醫領域。本研究包含海藻膠微米粒子與海藻膠奈米粒子兩種類型的複合材料，分別是利用空氣動力噴霧法（air dynamical atomization）合成搭載蛋白質與氫氧基磷灰石的海藻膠微米球（LSZ-HA@Alg）；另外則是結合預凝膠（pre-gel）和共沉澱法（co-precipitation）合成一系列無機／海藻膠奈米粒子，且能進一步合成無機殼層結構，包含CaBO3@Alg、ZIF-8@Alg和Fe3O4@CaP-Alg。海藻酸提供粒子形成時的穩定性，改善以往共沉澱法造成粒子大小差異性大且團聚等缺點，並且提供羧酸基以修飾標靶分子，其中修飾c(RGDfK)的Fe3O4@CaP-Alg-RGD用於標靶人類膀胱癌細胞T24。 　　Fe3O4@CaP-Alg具有Fe3O4的超順磁特性，而磷酸鈣殼層形成時能同步包覆抗癌藥Doxorubicin，包覆效率約為80 %。利用ICP-OES量測，修飾c(RGDfK)的複合材料於T24中的Fe3O4累積量相較於為修飾前提升3.13倍，代表此複合材料具有標靶細胞的功能。而搭載藥物並接上標靶分子後的Fe3O4@CaP(+)-Alg-RGD比起free doxorubicin更容易進入細胞而達到毒殺效果，相對細胞存活率依材料濃度的不同降至0.1-0.3之間。同時能藉由磁場導引材料至特定位置，提高局部位置的材料濃度，在不傷害周邊細胞的情形下，對於癌細胞有更好的抑制效果，達到誘導化學治療之功效。The purpose of this study is to fabricate a composite consisting of organic alginate and inorganic nanoparticles (including hydroxyapatite, Fe3O4, CaBO3, and ZIF-8) for biomedical applications. There are two types of composites synthesized in this study: (1) alginate-based microspheres and (2) alginate-based nanoparticles. For the part of alginated-based microspheres, proteins and hydroxyapatite nanoparticles can be encapsulated into alginate microspheres with diameters around 20-30 μm (named as LSZ-HA@Alg) via air dynamical atomization method. For the part of alginated-based nanoparicles, inorganic nanoparticles such as Fe3O4 and CaP were synthesized within the organic alginate polymer through a combination of pre-gel method and co-precipitation. We then functionalize Fe3O4@CaP-Alg nanocomposite with c(RGDfK) peptide for targeting bladder cancer cell line (i.e. T24). Fe3O4@CaP-Alg nanocomposite exhibits superparamagnetic property of Fe3O4, and the CaP shell can encapsulate an antitumor drug, doxorubicin with an encapsulation efficiency of about 80 %. With ICP-OES measurements, the accumulation of Fe3O4 in T24 for Fe3O4@CaP-Alg-RGD is 3.13 times more than that of Fe3O4@CaP-Alg, indicating the cell targeting ability. Furthermore, the relative cell viabilities decrease to 0.1-0.3, depending on the concentration of Fe3O4@CaP(+)-Alg-RGD. We can use magnetism to guide the synthesized nanocomposite to specific locations that can increase the local concentration of material and result in better inhibition of the cancer cell with the lowest impact on adjacent cells, which would be useful for guiding chemotherapy of bladder cancer.目錄 英文摘要 i 中文摘要 iii 致謝 iv 目錄 v 圖目錄 ix 表目錄 xiii 第一章 緒論 1 第二章 文獻回顧 3 2-1藥物載體（drug carriers） 3 2-1-1藥物載體的需求 3 2-1-2載體於生物系統 4 2-2新型載體或製劑 6 2-2-1含硼試劑（boron delivery agent） 6 2-2-2磷酸鈣（calcium phosphate） 8 2-2-3氧化鐵（iron oxide） 9 2-2-4類沸石咪唑骨架材料（zeolitic imidazolate framework） 11 2-3海藻酸（alginate） 15 2-3-1海藻酸的性質 15 2-3-2海藻酸成膠方式 16 2-3-3海藻膠顆粒的製備 18 2-3-4預凝膠（pre-gel）法 19 2-3-5海藻酸-無機複合材料及應用 20 2-4 膀胱癌（bladder cancer） 25 2-5標靶療法（target therapy） 26 2-5-1被動式標靶 26 2-5-2主動式標靶 26 2-6表面修飾（surface modification） 29 2-6-1常見表面修飾方法 29 2-6-2 EDC/NHS 31 第三章 研究動機與目的 33 第四章 實驗方法 34 4-1實驗藥品 34 4-2實驗儀器 36 4-3材料製備 37 4-3-1實驗總流程 37 4-3-2 HA@Alg微米顆粒製備 38 4-3-3硼酸鈣／海藻膠奈米粒子（CaBO3@Alg）製備 40 4-3-4 ZIF-8／海藻膠奈米粒子（ZIF-8@Alg）製備 41 4-3-5氧化鐵－磷酸鈣核殼（core-shell）結構／海藻膠奈米粒子（Fe3O4@CaP-Alg） 42 4-3-6 Fe3O4@CaP-Alg／Fe3O4@CaP(+)-Alg接上RGD peptide 43 4-4材料性質分析 45 4-4-1光學／螢光顯微鏡 45 4-4-2動態光散射粒徑及界面電位分析儀 45 4-4-3掃描式電子顯微鏡（SEM） 46 4-4-4穿透式電子顯微鏡（TEM） 46 4-4-5傅立葉轉換紅外吸收光譜（FTIR） 46 4-4-6感應耦合電漿原子發射光譜儀（ICP-OES） 46 4-4-7 X光繞射儀（XRD） 46 4-4-8超導量子干涉磁量儀（SQUID） 47 4-4-9紫外光可見光譜儀（UV-Vis） 47 4-4-10光激發螢光光譜儀（PL） 47 4-5 Fe3O4@CaP(+)-Alg藥物之釋放 47 4-6細胞實驗 48 4-6-1生物相容性與相對細胞存活率測試 48 4-6-2感應耦合電漿原子發射光譜儀（ICP-OES） 49 4-6-3顯微鏡實驗 50 第五章 結果與討論 52 5-1包覆HANPs之海藻膠微米顆粒（HA@Alg） 52 5-1-1材料性質 52 5-1-2 搭載模擬蛋白溶菌酶 58 5-1-3 生物相容性測試 61 5-2硼酸鈣／海藻膠奈米粒子（CaBO3@Alg） 61 5-2-1材料性質 62 5-2-2含硼量測定 66 5-2-3生物相容性測試 66 5-3 ZIF-8／海藻膠奈米粒子（ZIF-8@Alg） 67 5-3-1材料性質 67 5-3-2搭載模擬藥物R6G 72 5-3-3生物相容性測試 72 5-4氧化鐵－磷酸鈣核殼結構／海藻膠奈米粒子（Fe3O4@CaP-Alg） 73 5-4-1材料性質 74 5-4-2搭載藥物Dox與釋放測試 84 5-4-3細胞實驗 90 第六章 結論 97 第七章 未來展望 98 第八章 參考文獻 99 附錄 A 附錄A 以共沉澱法製備硼酸鈣奈米粒子（CaBO3） A 附錄B Fe3O4@CaP-Alg的TEM-EDS定性分析 E10332791 bytesapplication/pdf論文使用權限：不同意授權空氣動力噴霧法預凝膠海藻酸誘導化學治療膀胱癌[SDGs]SDG3thesishttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/261188/1/ntu-103-R01524018-1.pdf