指導教授：江伯倫臺灣大學：臨床醫學研究所高羽璇Kao, Yu-HsuanYu-HsuanKao2014-11-302018-07-062014-11-302018-07-062014http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/264379介紹 氣喘的盛行率在這十幾年不管兒童或成人都有迅速增加。 β arrestin 2，最初發現可以結合並去敏化G蛋白偶聯β2-腎上腺素能受體（β2-AR），β2-AR最近被認為是一種多功能適配器/支架蛋白，可以動態組裝廣泛的多蛋白複合物。此外，β-arrestin 2基因剔除動物已被發現比較不能被誘發過敏性氣喘（氣道高反應性）。我們進行這項研究調查台灣過敏兒童在周邊血液單核細胞β-arrestin2濃度和氣喘臨床症狀及病理表現之間的關聯性。 方法 本研究包括兒童（1）氣喘或過敏性鼻炎，（2）異位性皮膚炎，但沒有氣喘或過敏性鼻炎，和（3）正常對照組。他們都接受血液採樣由西方點墨法或螢光激發細胞分類分析，來檢測單核細胞細胞中的β arrestin 2。氣喘嚴重程度、肺功能、嗜酸性白血球細胞計數、細胞激素、總免疫球蛋白E(IgE)及特異性IgE也被記錄。 結果 我們收集95台灣兒童進行評估，包括11名健康兒童，83例氣喘患者，只有1名兒童是異位性皮膚炎組。在西方點墨法這一組，在氣喘兒童β arrestin 2的平均值比的異位性皮膚炎組β arrestin 2高。在螢光激發細胞分類組，β arrestin 2量在兒童輕度持續性氣喘比輕度間歇性氣喘較高（p= 0.054）。β arrestin 2的值與總IgE的值有顯著的正相關（r= 0.254，p= 0.028）。 結論 我們的研究是第一次與人類的周邊血液單核球β arrestin 2濃度和氣喘孩童臨床表現之相關報告。總IgE的血清濃度可能可以預測β arrestin 2的表現。嗜酸性白血球細胞計數的量和β arrestin 2及總IgE血清濃度有交互作用。Introduction Asthma has been rapidly increasing in prevalence over decades in children as well as in adults. Beta-arrestins, originally discovered as molecules that bind to and desensitize the activated and phosphorylated form of the G protein-coupled beta2-adrenergic receptor (β2-AR), have recently emerged as multifunctional adaptor/scaffold proteins that dynamically assemble a wide range of multiprotein complexes. Furthermore, beta-arrestin 2 knockout animals had been found failure to develop the signs of allergic asthma (airway hyperreactivity). We conducted this study to survey the association between the levels of beta-arrestin 2 in peripheral blood mononuclear cells and clinopathological manifestations of asthma in Taiwanese children. Methods This study included children with (1) asthma or allergic rhinitis, (2) atopic dermatitis but without asthma or allergic rhinitis, and (3) normal control. They all received blood sampling for detecting β-arrestin 2 in PBMCs (peripheral blood mononuclear cells) by WB (Western blots) or FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting). The asthma severity, eosinophil count, total IgE, specific IgE, cytokines, and lung function were also recorded. Results 95 Taiwan children are evaluated including 11 healthy children, 83 patients with asthma and only 1 child with atopic dermatitis. In the WB groups, the mean level of β-arrestin 2 in the asthmatic children was higher than the level of β-arrestin 2 in the only one child with atopic dermatitis. In our FACS results, the b-arrestin 2 amounts were higher in children with mild persistent asthma than mild intermittent asthma.(p=0.054) The expression level of β-arrestin 2 has a significantly positive correlation with total IgE (r=0.254, p=0.028). Conclusions Our study was the first report about that β-arrestin 2 may be involved in asthma by studying PBMCs in human. The serum levels of total IgE was a predictive factor of the expression of β-arrestin 2. The levels of eosinophil counts had interaction effect between the levels of b-arrestin 2 and total IgE.口試委員會審定書 i 誌謝 ii 中文摘要 iii 英文摘要 v 目錄 vii 圖目錄 ix 表目錄 xi 第一章 緒論 1 1.1 研究背景與文獻探討 1 1.1.1 氣喘疾病簡介 1 1.1.2 G -蛋白偶聯受體於結構生物學的新進展 1 1.1.3 乙型制動素-2 2 1.2 欲研究的問題及其重要性 4 1.3 研究假說 5 1.4 研究目的 5 第二章 研究方法與材料 7 2.1 個案收集（Patients） 7 2.1.1 研究架構 7 2.1.2 診斷策略（Diagnostic Strategies） 8 2.2 實驗方式 9 2.2.1 實驗工具 9 2.2.2 細胞分離與蛋白質濃度測定 10 2.2.3 西方點墨法 11 2.2.4 螢光激活細胞分選術（Fluorescence Activated Cell Sorting，FACS） 13 2.2.5 酵素結合免疫吸附分析法 (ELISA) 15 2.3 統計分析 16 第三章 研究結果 17 3.1 第一部份 西方點墨法 17 3.1.1 收案孩童的臨床特徵與實驗數據 17 3.2 第二部份 流速細胞儀分析(FACS analysis of intracellular βarrestin 2 in PBMN) 18 3.2.1 本研究收案孩童的臨床特徵與實驗數據 18 3.2.2 愈嚴重的氣喘病童其血球中乙型制動素-2 蛋白質的表現量愈高 20 3.3 第三部份 依據塵蟎過敏嚴重程度分組後臨床數據比較 21 第四章 討論 22 4.1 第一節 22 4.2 第二節 23 4.3 第三節 27 4.4 第四節 28 第五章 展望 29 第六章 參考文獻 311904040 bytesapplication/pdf論文使用權限：同意有償授權(權利金給回饋本人)氣喘孩童乙型制動素-2總免疫球蛋白E西方點墨法螢光激活細胞分選術[SDGs]SDG3thesishttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/264379/1/ntu-103-P98421021-1.pdf