謝文陽臺灣大學:海洋研究所江蕙君Chiang, Huey-JiunHuey-JiunChiang2010-05-062018-06-282010-05-062018-06-282009U0001-3007200909283700http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/181268本研究為了瞭解臺灣沿岸海域中抗四環黴素或抗氯黴素之細菌的豐度及其特性，於2007至2008年間，在臺灣的花蓮沿岸、基隆港口、新竹香山濕地、臺南四草外海設置採樣點進行採樣。 將樣本經過序列稀釋後，吸取定量稀釋水樣加入含有四環黴素或氯黴素的PY培養液進行增殖培養並且利用最大可能數法估算異營性細菌及抗藥性細菌在環境中的數量。實驗結果顯示，本研究各採樣地點所測得四環黴素抗性細菌的豐度明顯高於氯黴素抗性細菌的豐度。 將增殖過後的培養液塗盤待菌落生成後，挑選單一菌落並利用連續畫線法將分離株進行分離、純化和保存。各採樣地點共分離出86株對四環黴素或氯黴素具有抗藥性之細菌。再萃取所有分離株的DNA以PCR將各分離株的16S rDNA增幅擴大，以3種限制酶 (DdeI、RsaI和HhaI) 進行限制片段長度多樣性分析，共可分為15種基因型，代表株經16S rDNA定序，並與標準菌株序列比對，可歸類為Acinetobacter, Aeromonas, Alcanivorax, Alteromonas, Corynebacterium, Escherichia, Pseudoalteromonas, Pseudomonas, Serratia, Shewanella與Vibrio等十一屬之菌種，其中Corynebacterium屬於Actinobacteria，其餘十屬皆屬於γ-Proteobacteria。觀察分離株的生長特性、生理特性及菌落的形態特性和親緣之分析結果顯示A25 (Shewanella sp ), D6 (Pseudomonas sp.) 與X4 (Pseudomonas sp.) 三株分離株均可能為新種。研究最先發現水生環境中Altermonas, Alcanivorax 與Corynebacterium可能包含具四環黴素抗性基因之細菌；Acinetobacter, Alcanivorax, Altermonas與Serratia可能包含具氯黴素抗性基因之細菌。目錄文摘要 ........................................................................................................................... I文摘要 .......................................................................................................................... II一章 前言 .......................................................................................................... 1二章 材料與方法 .............................................................................................. 5一節 培養基 ........................................................................................................ 5二節 樣本採集 .................................................................................................... 6三節 培養、計數與分離 .................................................................................... 6四節 分離株之形態及生理、生化特性初步檢測 ............................................ 6五節 分離株之16S rDNA分析 ........................................................................ 11三章 結果 ........................................................................................................ 13一節 計數 .......................................................................................................... 13二節 抗藥性細菌的分離與篩選 ...................................................................... 14三節 各基因型代表株 16S rDNA序列分析 .................................................. 20四節 各基因代表株之細部生理生化特性分析 .............................................. 22四章 討論 ........................................................................................................ 23一節 計數 .......................................................................................................... 23二節 臺灣沿岸海水中抗藥性細菌之多樣性 .................................................. 24三節 各基因型抗藥性細菌之代表株與相近菌種比較 .................................. 26四節 臺灣沿岸海域中抗藥性分離株D6與相近菌種的比較 ....................... 31五節 臺灣沿岸海域中抗藥性分離株X4與相近菌種的比較 ....................... 33六節 臺灣沿岸海域中抗藥性分離株A25與相近菌種的比較 ..................... 33七節 臺灣沿岸海域抗藥性細菌之探討 .......................................................... 34五章 結論 ........................................................................................................ 36目錄 ............................................................................................................................ 43一、分離株16S rDNA RFLP分析結果 ........................................................... 43二、各採樣地點所分離株之數目、菌屬及編號 ............................................ 44三、各群分離株之生理生化特性 .................................................................... 45四、各基因型代表株與已知菌種的16S rDNA相似度 ................................. 46五、各群基因型代表株之細部生理生化測試 ................................................ 47六、各群代表株抗生素感受性測試 ................................................................ 50七、D6與相似菌種的比較表 .......................................................................... 51八、X4與相似菌種的比較表 .......................................................................... 52九、A25與相似菌種的比較表 ........................................................................ 53目錄 ............................................................................................................................ 54V一、採樣地點 .................................................................................................... 54二、利用MPN法估算各採樣點可培養異營性細菌數值 ............................. 55三、各採樣樣點抗四環黴素細菌之生菌數及其佔異營細菌生菌數之千分比 ............................................................................................................................... 56四、各採樣樣點氯黴素細菌之生菌數及其佔異營細菌生菌數之千分比 .... 57五、RFLP 分析之DdeI酶切片段電泳圖以及模擬圖 ................................... 58六、RFLP 分析之HhaI酶切片段電泳圖以及模擬圖 ................................... 59七、RFLP 分析之RsaI酶切片段電泳圖以及模擬圖 ................................... 60八、分離菌株D6之穿透式電子顯微鏡圖 ..................................................... 61九、分離菌株X4之穿透式電子顯微鏡圖 ..................................................... 62十、分離菌株A25之穿透式電子顯微鏡圖 ................................................... 63十一、分離株16S rDNA親緣演化樹分析 ..................................................... 64錄目 ............................................................................................................................ 65錄一、PY 培養基、PY培養液、PY保存培養基成份 ................................. 65錄二、 PYG 培養基、PYN培養液、CM培養液成份 ................................ 66錄三、MPN表 .................................................................................................. 67錄四、抗生素抑制圈大小判定 ........................................................................ 69錄五、分離株D6部分16S rDNA序列 .......................................................... 70application/pdf1853901 bytesapplication/pdfen-US四環黴素氯黴素海洋環境抗生素抗藥性基tetracyclinechloramphenicolantibiotic-resistant bacteriamarine environmentantibiotics[SDGs]SDG14thesishttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/181268/1/ntu-98-R96241210-1.pdf