林大盛臺灣大學：獸醫學研究所黃春申Huang, Chun-ShengChun-ShengHuang2007-11-282018-07-092007-11-282018-07-092004http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/59991雞球蟲症是又一種由艾美屬所引起的原蟲性疾病，其所導致的經濟損失於全球養雞產業具重大影響；不同種類的球蟲雖然可由卵囊形態及腸道病變部位等傳統作初步判定，但其結果仍令人懷疑，而以往被用來做為球蟲指紋鑑定的隨機增殖多形性核酸聚合酶鏈反應則因特異性的降低導致再現性不高；因此本研究主要目的在於使用PCR的技術區分種類及分析其種內差異，利用球蟲的Internal Transcribed Spacer-1(ITS-1)序列設計之艾美球蟲特異性引子及其他五組種別特異性引子，以活蟲疫苗做為金標準，並以台灣所分離到的E. acervulina及E. necatrix為DNA模板進行PCR反應，將得到的產物進行定序分析，結果與基因庫上所發表的同種球蟲ITS-1部分序列進行比對分析，了解到台灣地區E. acervulina、E. necatrix及E. tenella之ITS-1部分序列與基因庫所發表之序列相似性分別達100%、100%及97.6%。因此可利用這些引子區別E. acervulina、E. necatrix、E. tenella並進而分析種內差異。目錄------------------------------------------------------I 表次-----------------------------------------------------IV 圖次------------------------------------------------------V 中文摘要------------------------------------------------VII 英文摘要-----------------------------------------------VIII 第一章 緒言----------------------------------------------1 第二章 文獻探討------------------------------------------2 第一節 艾美球蟲分類--------------------------------2 1.1 寄生部位-----------------------------------4 1.2 肉眼病變-----------------------------------5 1.3 卵囊型態-----------------------------------5 1.4 最少體內繁殖時間---------------------------6 1.5 最少芽胞化時間-----------------------------6 1.6 裂殖體與配子體寄生於組織內之位置-----------7 1.7 寄生蟲位於上皮細胞質內之位置---------------7 第二節 生活史--------------------------------------8 2.1 芽胞繁殖期---------------------------------9 2.2 裂體繁殖期--------------------------------10 2.3 配子繁殖期--------------------------------10 第三節 致病性------------------------------------------11 第四節 診斷方法的進展----------------------------------12 4.1 1997年------------------------------------13 4.2 1998年------------------------------------14 4.3 1999年------------------------------------15 4.4 2000年------------------------------------16 4.5 2001年------------------------------------17 4.6 2002年------------------------------------17 4.7 2003年------------------------------------18 4.8 2004年------------------------------------19 第五節 疫情---------------------------------------19 5.1 國內動物疫情------------------------------20 5.2 國外動物疫情------------------------------20 第六節 抗球蟲藥之發展-----------------------------21 6.1 藥物上市前的準備--------------------------21 6.2 抗藥性帶來的挑戰--------------------------22 第七節 疫苗的開發---------------------------------23 7.1 活毒球蟲疫苗------------------------------24 7.2 減毒球蟲疫苗------------------------------25 7.3 anti-idiotype antibodies------------------26 7.4 基因工程疫苗------------------------------26 第八節 Eimeria species間的親緣關係---------------27 第三章 材料與方法---------------------------------------30 第一節 試驗設計----------------------------------31 第二節 球蟲卵囊的純化----------------------------31 第三節 萃取DNA-----------------------------------33 第四節 引子之設計--------------------------------35 第五節 PCR偵測技術-------------------------------36 第六節 瓊脂電泳----------------------------------37 第七節 自電泳膠體回收純化DNA片段-----------------38 第八節 核酸定序----------------------------------40 第四章 結果---------------------------------------------41 第一節 PCR反應條件-------------------------------41 第二節 特異性引子之設計及PCR反應結果-------------41 第三節 核酸定序及分析----------------------------44 第五章 討論---------------------------------------------46 第六章 結論---------------------------------------------50 表-------------------------------------------------------51 圖-------------------------------------------------------60 參考文獻-------------------------------------------------87en-US雞球蟲症艾美球蟲Avian coccidiosisEimeriaITS1thesis