杜宜殷臺灣大學:園藝學研究所李宜龍Lee, Ei-LongEi-LongLee2010-05-052018-06-292010-05-052018-06-292008U0001-2407200815130300http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/180878為了暸解並調控更年性果實苦瓜之後熟及更年性花卉蝴蝶蘭之花瓣老化，本研究進行乙烯訊息傳導途徑下游之轉錄調控蛋白EIN3/EILs 同源基因之選殖。以苦瓜EIN3同源選殖系pMcEIL56 cDNA 為探針，篩選苦瓜基因組庫，共得到16個基因選殖系。依電泳分離與南方氏雜交分析結果，選取選殖系λMEIL137-2進行次選殖與定序分析。比對pMcEIL56 cDNA序列，λMEIL137-2包含完整之Mc-EIL1基因，序列長3,618 bp，具有2個顯子與1個隱子，並取得5’-flanking序列2,768 bp。其中第一顯子長117 bp，第二顯子長2,355 bp，而第一隱子長1,147 bp，轉譯起始密碼位於第二顯子193 bp處。該基因啟動子具有多種responsive elements，可能受到Auxin、ABA、Jasmonate、逆境等因子共同參與啟動子之調控。 另ㄧ方面，以蝴蝶蘭pPEIL168 cDNA作為探針，篩選蝴蝶蘭基因組庫，共得到14個選殖系。依電泳分離及南方氏雜交分析結果，選取λPEIL 51、53、67等選殖系進行次選殖與基因定序。選殖系λPEIL51與pPEIL177 cDNA 核苷酸1~914 bp序列完全相同，將其基因命名為 Pt-EIL1-1，包含Pt-EIL1-1 基因之5’-flanking 序列3,215 bp、第一顯子166 bp、第一隱子3,223 bp 與第二顯子748 bp，顯子與隱子連接部位符合GT- AG rule，而轉譯起始密碼位於第二顯子98 bp處。選殖系λPEIL 67與pPEIL168 cDNA 核苷酸1~166 bp序列完全相同，將其對應基因命名為 Pt- EIL1-2包含Pt-EIL1 -2基因之 5’-flanking 序列4,104 bp、第一顯子166 bp與第一隱子部分序列199 bp。Pt-EIL1-1與Pt-EIL1-2 基因相對應之5’-flanking region與第一顯子序列相似度為分別為87.6%與99.4%。選殖系λPEIL53與pPEIL177 cDNA核苷酸1,239~2,175 bp序列相似度為99.3 %，共有7個核苷酸相異，導致2個胺基酸不同，推測該基因為PtEIL1-1之等位基因。Pt-EIL1之啟動子亦具有多種responsive elements，可能受到auxin、ABA茉莉酸、乾旱、創傷等因子共同調控啟動子之作用。中文摘要 1ummary 3、 前言 5、 前人研究 6、乙烯與苦瓜果實後熟及蝴蝶蘭花瓣老化之關係 6、植物體內乙烯生合成路徑與調控 6、植物乙烯訊息傳導 7一) 乙烯受體基因家族 7二) 激酶蛋白 CTR1 8三) 膜蛋白 EIN2 9四) 核蛋白 EIN3/EILs 9五) EIN3 與 ubiquitin / proteosome 蛋白質降解路徑之關係 10六) EIN3 結合蛋白 EBF1 / EBF2 11七) 核酸外切酶 (exoribonuclease) EIN5 / EIN7 / XRN4 12、各物種EIN3/EILs基因之選殖及表現情形 12ㄧ) 阿拉伯芥 12二) 菸草 14三) 番茄 14四) 康乃馨 15五) 玫瑰 15六) 綠豆 16七) 苦瓜、蝴蝶蘭、文心蘭與香蕉 16、材料方法 19、植物材料 19、試驗方法 19一)　 苦瓜與蝴蝶蘭 EIN3 同源基因之選殖 19二)　 苦瓜與蝴蝶蘭 EIN3 同源基因限制酶圖譜分析 23三)　 苦瓜與蝴蝶蘭 EIN3 同源基因之次選殖 24四)　 苦瓜 EIN3 同源基因啟動子表現質體之構築 26肆、結果 32、苦瓜 EIN3 同源基因結構分析 32一)　 苦瓜基因組庫之篩選結果 32二)　 苦瓜 EIN3 同源基因限制酶圖譜分析 32三)　 苦瓜 EIN3 同源基因序列分析 33四)　 苦瓜 EIN3 同源基因啟動子序列分析 33、蝴蝶蘭基因組庫之篩選 47一)　 蝴蝶蘭基因組庫之篩選 47二)　 蝴蝶蘭 EIN3 同源基因限制酶圖譜分析 47三)　蝴蝶蘭EIN3 同源基因序列分析 48四) 蝴蝶蘭 EIN3 同源基因啟動子序列分析 49、討論 68、苦瓜與蝴蝶蘭EIN3同源基因之結構 68、苦瓜與蝴蝶蘭EIN3同源基因之啟動子序列分析 70、結語 73、參考文獻 74application/pdf1665978 bytesapplication/pdfen-US苦瓜蝴蝶蘭乙烯訊息傳導Bitter GourdPhalaenopsisEthylene Insensitive 3thesishttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/180878/1/ntu-97-R95628108-1.pdf