果伽蘭臺灣大學：生化科學研究所王聖彣Wang, Shen-WenShen-WenWang2007-11-262018-07-062007-11-262018-07-062007http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/52812人類T細胞受器基因理論上有極高的多樣性，而目前對淋巴結內T細胞受器的使用情形了解不多，也不知道究竟化療會對病人T細胞有何影響，因此我們在本論文中分析了普通人淋巴結、乳癌病人患部切除之淋巴結、病人之周圍血液(PBL)內之T細胞受器Vα1基因使用情形後，發現單一淋巴結內其T細胞接受器的種類並不會很高，很可能身體不同部位之淋巴結其內含的T細胞受器種類並不一樣。比較正常人淋巴結還有周圍血液中T細胞受器Vα1基因和已接受化療的乳癌病人血液內所含之T細胞受器Vα1基因，發現正常人血液中的T細胞受器種類和淋巴結內所含之T細胞受器重複性很低，這個結果顯示出影響T細胞homing的原因之一可能包含其本身T細胞受器基因；在化療後乳癌病人血液中則是出現了不少和其他淋巴組織才有的T細胞受器基因，提供了一個直接的證據證實化療改變了周圍血液中T細胞的組成，且身體為了維持T細胞數量的恆定性，會改變T細胞的homing，導致組織中的T細胞轉而進入血液中。 腫瘤浸潤T細胞(tumor-infiltrating T cells， TIL)是指存在於腫瘤中的T細胞，我們分析了五位腫瘤病人其TIL所帶的T細胞受器，發現到三位惡性腫瘤的病人之TIL所含的T細胞受器種類幾乎都很複雜，而兩位良性腫瘤內的T細胞受器種類都是單一一種，在靠近惡性腫瘤周圍正常組織中的T細胞受器種類也很單純，在累積更多的研究資料後，將來可能可以當作輔助判斷腫瘤良性惡性的方法之一及幫助了解免疫反應中T細胞如何對應變異細胞，像是癌細胞。Human T cell repertoire is known to be complex and has a great diversity. However, very little information is known for the T cell receptor (TCR) usage in human lymph nodes, nor is the effect of chemotherapy on human T cells as examined at the TCR sequence level in vivo. I n this study, we have performed a detail TCR V目錄……………...…………………………………………………. i 圖目錄...…………………………………………………………….. iii 表目錄.......………………………………………………………….. iv 中文摘要……………………………………………………………. v Absstract .……….…………………………………………………. vi 縮寫表……………………………………………………………… vii 前言………..………………………………………………. 1 1.1免疫系統……………………………………………………...… 1 1.2 T細胞和B細胞………………………………………………… 1 1.2.1 T細胞……………………………………………………………………. 1 1.2.2 B細胞……………………………………………………………………. 2 1.3 T細胞受器………………………………………………………. 2 1.4 T細胞受器的多樣性……….…………………………………. 3 1.5 CDR3對T細胞受器辦認其抗原的重要性……………………. 5 1.6 自體免疫和T細胞之關係……………………………………… 5 1.7 不變T細胞受器………………………………………………… 6 1.8 本論文所探討的主要問題……………………………………… 7 實驗材料和方法……………………………………..……... 8 2.1 實驗材料………………………………………………………… 8 2.2 實驗方法………………………………………………………… 8 2.2.1 分離出周邊淋巴球……………………………………………………….. 8 2.2.2訊息核醣核酸與單股互補去氧核醣核酸的製備……………………….., 8 2.2.3訊息核醣核酸與單股互補去氧核醣核酸的製備……………………….., 9 2.2.4 選殖(cloning)……………………………………………………………… 9 2.2.4.1去氧核醣核酸的接合反應……………………………………………... 9 2.2.4.2 勝任細胞的製備………………………………………………………. 10 2.2.4.3 轉型作用………………………………………………………………. 10 2.2.4.4菌落聚合酶鍊鎖反應………………………………………………….. 10 2.2.4.5瓊酯明膠膠體電泳…………………………………………………….. 11 2.2.5 核酸序列分析…………………………………………………………….. 11 2.2.5.1 循環反應………………………………………………………………. 11 2.2.5.2聚丙烯胺凝膠電泳分析……………………………………………….. 12 2.2.5.3自動核酸序列分析…………………………………………………….. 12 結果………………………………………………………... 13 3.1普通人淋巴結T細胞受器Vα1基因使用情形………………... 13 3.2化療後乳癌病人T細胞受器Vα1基因使用情形……………. 13 3.3腫瘤病人腫瘤浸潤T細胞受器Vα1、Vδ5使用情形……… 15 討論……………………………………………………..…. 16 4.1普通人淋巴結T細胞受器Vα1基因使用情形………………... 16 4.2化療後乳癌病人T細胞受器Vα1使用情形………………….. 16 4.3腫瘤病人腫瘤浸潤T細胞受器使用情形……………………… 17 參考文獻…………………………………………………... 20 圖 目 錄 圖一 普通人淋巴結Jα使用情形長條圖……………………….. 23 圖二 乳癌病人淋巴結Jα使用情形長條圖…………………….. 23 圖三 Gel picture of Fragment Sequencing ……………………. 24 表 目 錄 表一 普通人淋巴結內重複出現之T細胞受器序列整理……….. 25 表二 普通人淋巴結內T細胞受器相似序列之整理…………….. 26 表三 乳癌病人淋巴結B 有expansion序列…..………………… 27 表四 乳癌病人TIL、淋巴結相同序列………………………….. 28 表五 乳癌病人周邊血液中和淋巴組織中相似和相同的序列….. 29 表六 五位腫瘤病人TIL資料整理………………………………. 31822376 bytesapplication/pdfen-US化療,乳癌,T細胞接受器,淋巴結chemotherapy,breast cancer,T cell receptor,lymph node[SDGs]SDG3otherhttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/52812/1/ntu-96-R94b46032-1.pdf