蔣丙煌臺灣大學：食品科技研究所曾勺瑄Tseng, Shao-HsuanShao-HsuanTseng2007-11-272018-06-292007-11-272018-06-292006http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/56345本研究以液態方式培養靈芝（Ganoderma lucidum），並以靈芝醱酵濾液中具免疫調解活性之1,3-β-D-glucan做為指標成分，探討醱酵條件的改良，最後以靈芝醱酵之多醣產物對U937細胞的間接抑制效果進行免疫調節功效之評估。 實驗中以黑豆5％、黃耆2％、葡萄糖2％作為醱酵基質，於5L醱酵槽進行12天的培養，探討葡萄糖的饋入時間點對指標性成分之影響，由結果可得知第六天饋入1%葡萄糖可在醱酵時間內即時抑制1,3-β-D-glucanase活性，並提高濾液中1,3-β-D-glucan產量1.54倍。在幾丁質合成酶抑制劑Polyoxin B的添加條件之探討上則發現，第八天饋入1.5 ppm可在不嚴重影響菌體生長的情況下，可能藉由促使分泌至胞壁中之結構性多醣無法與幾丁質鍵結而游逸至醱酵濾液中，而達提高濾液中1,3-β-D-glucan產量1.68倍之結果。 於免疫調節功能方面，發現靈芝醱酵多醣產物對於U937細胞之間接抑制能力除了與1,3-β-D-glucan所佔比例有關外，亦受其分子量大小與分支程度之影響，而其中以第六天饋入1%葡萄糖之醱酵條件有最佳之抑制效果，且在其製備之單核細胞條件培養液中亦可偵測到較高之TNF-α、IL-1β與IFN-γ含量。The objectives of this research were to determine the optimum fermentation condition and to enhance the 1,3-β-D-glucan production of Ganoderma lucidum in submerged culture. The immunopotentiation of the polysaccharide from G. lucidum fermentation was evaluated by the inhibitory ratio of leukemic U937 cell as an model. The basic medium consisted of 5% black soybean, 2% Huangqi and 2% glucose. Furthermore, 1% glucose was added on day 4, 6 and 8, respectively. The effect of feeding time during the 12-day cultivation in 5L fermentor was evaluated. Addition of 1% glucose on day 6 inhibited the 1,3-β-D-glucanase activity and enhanced 1.54-flod 1,3-β-D-glucan in the culture. Moreover, the addition of chitin synthase inhibitor, Polyoxin B (1.5 ppm), probably reduced the binding between the structure glucan and chitin in cell wall, and therefore enhanced 1,3-β-D-glucan content up to 1.68 fold on day 8 without affecting cell growth. The inhibitory ratio of leukemic U937 cell resulted from the G. lucidum polysaccharides was positive correlated to the percentage of 1,3-β-D-glucan, molecular weight and degree of branching. Moreover, significant increases of TNF-α, IL-1β and IFN-γ in the mononuclear condition medium treated with the polysaccharidrs of 1% glucose fed-batch on day 6 were observed.中文摘要 I Abstract II 前言 1 壹、 文獻回顧 2 一、 靈芝之簡介 2 (一) 靈芝的分類 2 (二) 靈芝活性成分 3 (三) 靈芝栽培方式 13 (四) 靈芝的液態醱酵 14 二、 真菌生長代謝相關酵素之調控 22 (一) 真菌細胞壁合成機制 22 (二) Chitin synthase 活性抑制 25 (三) 1,3-β-D-glucanase 活性抑制 27 (四) Glucan synthase 活性調節 29 三、 豆科基質之簡介 32 (一) 黑豆之簡介 32 (二) 黃耆之簡介 33 四、 人類白血病細胞株U937之特性 36 (一) U937細胞株之建立 36 (二) U937細胞株之特性 36 (三) U937細胞株之誘導分化物質 37 (四) U937細胞株分化之改變 38 五、 免疫學之應用 40 (一) 人類免疫反應(Goldsby et al., 2004) 40 (二) 細胞激素(Goldsby et al., 2004) 42 (三) 人類周邊血之免疫細胞與抗腫瘤能力 45 (四) 人類周邊血之免疫細胞間接誘導U937分化 47 (五) 人類週邊血免疫細胞之應用 48 貳、 實驗架構 49 第一部分：醱酵條件之探討 49 一、 最適醱酵天數之探討 49 二、 葡萄糖饋入時間點之探討 50 三、 Polyoxin B 饋入條件之探討(搖瓶試驗) 51 四、 Polyoxin B 饋入條件之探討(醱酵槽試驗) 52 第二部份：靈芝醱酵產物免疫功能之評估 53 參、 材料方法 54 一、 Ganoderma lucidum醱酵豆科植物之實驗 54 (一)實驗材料 54 (二)實驗方法 57 二、 靈芝醱酵產物對人類血癌細胞株U937間接抑制之實驗 65 (一) 實驗材料 65 (二) 實驗方法 67 肆、 結果與討論 72 第一部分：醱酵條件之探討 72 一、 最適醱酵天數之探討 72 (一) 醱酵過程中靈芝菌生長情形之變化 72 (二) 醱酵過程中靈芝菌生成1,3-β-D-glucan之情形 73 二、 葡萄糖饋入時間點之探討 76 (一) 葡萄糖的饋入對靈芝菌生長之影響 76 (二) 葡萄糖的饋入對1,3-β-D-glucan產量之影響 77 三、 Polyoxin B饋入條件之探討（搖瓶試驗） 79 (一) polyoxin B的饋入對於搖瓶培養過程中靈芝菌生長情形之影響 80 (二) polyoxin B的饋入對於搖瓶培養過程中靈芝菌生產1,3-β-D-glucan之影響 81 四、 Polyoxin B饋入條件之探討（醱酵槽試驗） 83 (一) polyoxin B的饋入對醱酵槽培養過程中靈芝菌生長情形之影響 83 (二) polyoxin B的饋入對於醱酵槽培養過程中靈芝菌生產1,3-β-D-glucan之影響 84 第二部份：靈芝醱酵產物免疫功能之評估 89 一、 靈芝醱酵濾液多醣對於U937細胞間接抑制之效果 89 二、 靈芝菌絲體水萃多醣對於U937細胞間接抑制之效果 93 三、 靈芝醱酵濾液多醣對人類單核細胞產生細胞激素之影響 94 伍、 結論 129 柒、 參考文獻 1311099499 bytesapplication/pdfen-US靈芝葡聚醣酶幾丁質合成酶Ganodermaglucanasechitin synthasethesishttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/56345/1/ntu-95-R93641010-1.pdf