陳健弘2006-07-262018-07-112006-07-262018-07-112001http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/23516B 型肝炎在台灣是個非常嚴重的問 題，大約15-20 ﹪的成年人是B 型肝炎帶原 者。B 型肝炎病毒的感染更是台灣地區慢 性肝炎、肝硬化，肝細胞癌的主要原因。 不少的研究顯示，B 型肝炎病毒本身並不 會造成細胞毒性，而是經由引發宿主免疫 系統而導致肝炎。另一方面，宿主對B 型 肝炎病毒免疫系統反應的強弱，也與B 型 肝炎病毒的清除有關。從文獻的回顧顯 示，在急性B 型肝炎的病人，其體內的B 型肝炎病毒特異性T 細胞反應較強。相反 的，在慢性B 型肝炎的病人，其體內的T 細胞反應較為微弱。T 細胞反應的強弱似乎與B 型肝炎病毒在體內的清除有關。然而，以往的研究所使用的免疫學分 析方式仍有一些缺點，那些方法比較耗 時，敏感度也較低，所以有可能低估了體 內B 型肝炎病毒特異性的T 細胞反應。最 近有二種免疫學分析方法可以用來分析抗 原特異性T 細胞反應：ELISPOT 與細胞內 細胞激素染色。這兩種方法其敏感度可以 比以往的方法提高100 倍以上，也不須要 冗長的體外抗原再刺激。已有數個研究成 功的利用這些方法來研究CMV 病毒，愛滋 病毒，或皮膚黑色素癌腫瘤抗原特異性的T細胞反應。因此，本研究利用ELISPOT 與細胞內 細胞激素染色法的方式，來分析慢性B 型 肝炎病人B 型肝炎病毒特異性的T 細胞反 應。我們成功的建立了ELISPOT 與細胞內 細胞泌素染色法的分析方式，我們發現在 慢性B 型肝炎的病人，其體內的B 型肝炎 病毒特異性T 細胞反應相當微弱，甚至偵徹不出來。我們的結果意味著，微弱的B 型肝炎病毒特異性T 細胞反應，可能與慢性B 型 肝炎病毒帶原的致病機轉有關。所以，強 化B 型肝炎病毒特異性T 細胞反應，可能 是未來治療慢性B 型肝炎的方向之一。Taiwan is a hyperendemic area of hepatitis B virus (HBV) infection. Around 15-20% adults in Taiwan are chronically infected with HBV. Previous studies demonstrated vigorous T cell responses to HBV-encoded antigens developed in patients with self-limited acute hepatitis B. In contrast, weak or no T cell responses could be detected in chronic hepatitis B patients. The immunological assays used in these previous studies are T cell proliferating assay or cytokine ELISA assay in bulk cultures of peripheral blood mononuclear cell (PBMC) for CD4 + T cell responses, and chromium release assays for CD8 + T cell responses. These techniques suffer from the drawback that they do not enable analysis of single cell responses in the context of unselected cellular background and need prolonged in vitro restimulation. These methods may underestimate the antigen-specific T cell responses in chronic hepatitis B patients.. In contrast, ELISPOT assay and intracellular cytokine staining are exquisitely sensitive and can detect low frequency T cells. They can detect the cytokine release from an activated T cell and can be used for enumeration of single cytokine-secreting cells. These assays are believed to be at least 30-100 times more sensitive than the chromium release assay, and is efficient and fast because it does not require any in vitro cellular proliferation. Therefore, in this current project, we applied the ELISPOT assays and intracellular cytokine staining to assess the HBV antigen-specific CD4 + and CD8 + T cell responses in patients infected with HBV. We successfully establish the ELISPOT and intracellular cytokine staining assays. However, only weak or no T cell responses was detected in patients with chronic HBV infection. This implied that T cell hypo-responsiveness may play an important role in the pathogenesis of chronic hepatitis B. Thus, enhancing the HBV-specific T cell responses would be one of the therapeutic targeting for chronic hepatitis B.application/pdf94776 bytesapplication/pdfzh-TW國立臺灣大學醫學院內科B 型肝炎T 細胞反應ELISPOT細胞內細胞激素染色法hepatitis B virusantigen-specific T cell responsesintracellular cytokine stainingCD4+CD8+[SDGs]SDG3reporthttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/23516/1/892315B002037.pdf