江文章臺灣大學：食品科技研究所鄭妃彣Zheng, Fai-wenFai-wenZheng2007-11-272018-06-292007-11-272018-06-292006http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/56339薏苡（Coix lachryma-jobi L. var. ma-yuen Stapf.）為禾本科一年生草本植物，自古以來即為藥食兼用，傳統醫藥書籍記載其具有除溼利尿、健脾益胃、消炎止痛等功能。目前許多研究報告指出薏苡麩皮甲醇萃出物具抑癌之生理機能，但其主要抗癌活性成分尚未明瞭。本實驗以活性區分為導向來探討薏苡麩皮甲醇萃取物對人類肺癌細胞株 A549 以及腸癌細胞株HT-29 生長之離體效應。以極性大小將薏苡甲醇萃取物依序區分成正己烷、乙酸乙酯、正丁醇層、水層。MTT分析結果發現乙酸乙酯層具有顯著抑制癌細胞之生長能力，故進一步利用管柱層析法及高效能液相層析法等分離技術將乙酸乙酯層分離純化，並以NMR、IR and Mass，鑑定化合物結構。在抗癌活性較佳之乙酸乙酯次區分層(30％-60％ EA/HEX)中分離鑑定出七種化合物。七種化合物中，包植物固醇Sitgmasterol、β-sitosterol、stigmastan-3β-ol、3β-hydroxystigmast-5-en-7-one和酚類化合物3,3’- Dimethoxybiphenyl-4,4’-diol及6-Methoxy-2(3H)-benzoxazolinone，3-O- Caffeoyl-β- sitosterol。Adlay (Coix lachryma-jobi L. var. ma-yuen Stapf) is a grass crop that has long been used in traditional Chinese medicine and as a nourishing food. According to the folklore of China and Japan, adlay possesses the stomachic, diuretic, antipholgistic, anodynic, antispasmodic, and antitumor effects. A number of recent studies have revealed the physiological mechanism in anti-tumor effects of the adlay bran methanolic extracts, but little is known about its active compounds. Oriented by the separation of active fractions, the aims of this study are to discuss the effects in vitro of adlay bran methanolic extracts on the growth of human lung cancer cell A549 and the colon cancer cell HT-29. Based on the degree of polarity, the adlay bran methanolic extracts are separated to hexane layer, ethyl acetate layer, butanol layer and water layer. The results of MTT analysis showed that the ethyl acetate layer had the significant capacity against growth of cancer cell, so we further isolated and purified the ethyl acetate layer via column chromagraphy and high perferomance liquid chromagraphy to identify their chemical structures by NMR、IR and Mass. Seven chemicals were purified and identified from the ethyl acetate subfraction (30%-60% EA/HEX) which had the better anti-tumor activities. Those of the seven chemicals are sitgmasterol、β-sitosterol、stigmastan-3β-ol、3β-hydroxystigmast-5- en-7-one, 3, 3’-dimethoxybiphenyl-4, 4’-diol, and 6-methoxy-2(3H) - benzoxazolinone,and 3-O-caffeoyl-β-sitosterol.中文摘要----------------------------------------------I 英文摘要----------------------------------------------II 目錄--------------------------------------------------III 圖表--------------------------------------------------VI 中英文縮寫表------------------------------------------VIII 壹、前言 1 貳、文獻整理 3 一、癌症 3 (一) 癌症之威脅 3 (二) 癌症常見成因 3 (三) 細胞之凋亡 5 二、薏苡 8 (一) 薏苡簡介 8 (二) 薏苡本草簡介 8 (三) 薏苡之成分生理機能性 10 (四) 薏苡之抗腫瘤的研究 10 參、研究動機與目的 19 肆、實驗設計與架構 19 伍、薏仁麩皮甲醇萃取物之不同極性分配區分層防癌活性探討22 一、 實驗材料 22 (一) 薏苡麩皮樣品製備 22 (二) 試驗藥品 22 (三) 細胞培養用品 23 (四) 細胞株 23 (五) 儀器設備 23 二、實驗方法 24 (一) 薏苡麩皮甲醇萃取物之不同極性分配區分層之製備 24 (二) 癌細胞毒性或生長抑制之生物檢定 24 1.細胞培養 24 2.細胞計數 25 3.細胞生長存活分析 26 4.細胞週期調控試驗 29 (三) 統計分析 30 三、結果與討論 31 (一) 利用粒線體去氫酶活性測定薏苡麩皮甲醇萃取物之不同極性分配區分層對人類肺、腸癌細胞生長抑制作用 31 (二) 利用DNA電泳法測定薏苡麩皮甲醇萃取物之乙酸乙酯層對人類肺、腸癌細胞生長抑制作用。 32 (三) 利用flow測定薏苡麩皮甲醇萃取物之乙酸乙酯層對人類肺、腸癌細胞生長抑制作用。 33 四、結論 41 陸、薏仁麩皮甲醇萃取物防癌活性成分之分離與純化 42 一、 實驗材料42 (一) 薏苡麩皮樣品製備 42 (二) 試驗藥品 42 (三) 儀器設備 42 二、實驗方法 44 (一) 薏苡麩皮甲醇萃取物乙酸乙酯層之分離與純化 44 (二) 薏苡麩皮甲醇萃取物之次區分層合併依據 46 (三) 化合物的結構分析與鑑定 46 (四) 防癌模式之檢測 47 三、結果與討論 48 (一) ABM之乙酸乙酯層經Silica gel 層析分離後之 次區分層對癌細胞的生長抑制作用 48 (二) ABM之乙酸乙酯層次區分層H I 之成分分離 52 (三) 純化合物結構摘要 54 (四) 純化合物之結構分析與鑑定 56 1. 化合物( 1 ): Stigmasterol 56 2. 化合物( 2 ): β-Sitosterol 56 3. 化合物( 3 ): 3β-Hydroxystigmast-5-en-7-one 60 4. 化合物( 4 ): Stigmsten-3β-ol 63 5. 化合物( 5 ):3,3’-Dimethoxybiphenyl-4,4’-diol 66 6. 化合物( 6 ): 6-Methoxy-2(3H)-benzoxazolinone ( coixol ) 69 7. 化合物( 7 ): 3-O-Caffeoyl-β-sitosterol 73 四、結果與討論77 柒、總結 80 參考文獻 812465900 bytesapplication/pdfen-US薏苡麩皮甲醇萃取物細胞毒性成分肺癌細胞腸癌細胞adlay bran methanolic extractscytotoxicity Constituentshuman lung cancer cell A549colon cancer cell HT-29[SDGs]SDG3thesishttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/56339/1/ntu-95-R93641018-1.pdf