國立臺灣大學植物病理與微生物學系暨研究所林長平2006-07-262018-06-292006-07-262018-06-292003http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/17687花生簇葉病（Peanut witches’ broom, PNWB）是由植物菌質體（phytoplasma） 所引起之病害。Gyrase 是由gyrA 及gyrB 基因分別轉譯出的兩個A subunits 及 兩個B subunits 所共同組成。本研究為進行花生簇葉病病原菌質體gyrB 及gyrA 基因選殖。以Acholeplasma laidlawii 及Mycoplasma spp. 等細菌之gyrB 基因進 行比對，根據其高保守性區域設計PCR 引子。以罹病日日春植株全DNA 及健康 植株全DNA 為模板分別進行PCR 反應，結果以罹病植株全DNA 為模版時可獲 得一1.4 kb 大小之PCR 產物，此片段為以健康植株全DNA 為模板，進行PCR 反應時無法增幅出。將此1.4 kb 大小之PCR 產物進行核甘酸序列之分析及比對， 發現此序列與NCBI 資料庫中gyrB 基因之核甘酸序列具相似性，並以此序列設 計PCR 引子對以增幅出篩選用核酸探針，並以此探針對花生簇葉病病原菌質體 之基因庫進行篩選之工作，以利選殖出具有嵌入片段包含完整gyrB 之ORF 之重 組質體。由其他細菌上的研究中指出，在革蘭氏陽性菌上gyrB 及gyrA 基因常以 coupled（gyrB-gyrA）的方式存在（Ladefoged et al. 1994, Oppegaard et al. 1996）。 為了進一步選殖出完整的gyrA 基因，擬利用已部分解序完成的gyrB 基因序列設 計一股正股引子，並至GCG 基因庫中收集包括Bacillus sp.、Mycoplasma genitalium 及E. coli 等細菌之gyrA 基因核酸序列與胺基酸序列，進行gyrA 基因 序列比對及反股引子（reverse primer）的設計，以進行gyrA 基因選殖之工作。DNA gyrase is a type II topoisomerase that is a tetrameric molecule composed of two A and two B subunits, which are encoded by the gyrA and gyrB genes, respectively. In order to clone and analyses the gyrB gene, a pair of oligo-nucleotides PCR primer GBF2/ GBR3 was designed according to the sequences of the gyrB gene of Acholeplasma laidlawii, Escherichia coli, Bacillus sp., Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae, Streptomyces spheroides, Spiroplasma citri and Mycoplasma spp. Total DNA from diseased periwinkle infected with phytoplasma associated with peanut witches’ broom （PNWB）was prepared for PCR reaction to amplify a 1458 bp-PCR fragment of the gyrB gene of the phytoplasma. A 768 bp-PCR product was then amplified by using the primers GBF3, GBR5 synthesized according to the sequences of the 1458 bp-PCR fragment and used as a nucleic acid probe for the screening of the Lambda ZAP II genomic library of PNWB-phytoplasma.application/pdf191066 bytesapplication/pdfzh-TW國立臺灣大學植物病理與微生物學系暨研究所gyrB 基因gyrA 基因花生簇葉病植物菌質體gyrB genegyrA genepeanut witches broomphytoplasmaotherhttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/17687/1/912313B002336.pdf