呂廷璋臺灣大學：食品科技研究所余惠菁Yu, Hui-ChingHui-ChingYu2007-11-272018-06-292007-11-272018-06-292007http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/56292巴西洋菇（Agaricus blazei Murill）是一種食藥兼用的菌菇，其子實體與菌絲發酵物之多醣區分已被證實具有免疫調節和抗腫瘤之生理活性。本研究目的在針對巴西洋菇菌絲發酵物中之水溶性多醣進行劃分純化，單離出具代表性之活性多醣，並對其特性做探討。結果顯示，巴西洋菇菌絲發酵物之水溶性粗多醣依電荷的差異，以陰離子交換樹脂(DEAE)劃分為五種區分，包括中性多醣(CP-FⅠ)、低蛋白含量多醣(CP-FⅡ)與高蛋白含量酸性多醣(CP-FⅢ)，及多醣蛋白複合體(CP-FⅣ,CP-FⅤ)，其中CP-FⅢ、CP-FⅣ和CP-FⅤ區分具有顯著刺激小鼠巨噬細胞株RAW 264.7產生TNF-α之活性。若以蛋白分解酵素和trichloroacetic acid (TCA) 處理水溶性粗多醣，則粗多醣中分別有63.5% 和88.5% 蛋白質會被除去，但CP-FⅢ、FⅣ 和FⅤ之蛋白質仍無法完全去除。活性區分CP-FⅢ之單糖組成以甘露糖和半乳糖為主，並含有葡萄糖、阿拉伯糖和岩藻糖以及另外含3.5％ 醛醣酸與3.1％蛋白質；分子量398.8 kDa，分子量分散度為3.6，因此依據分子量分成CP-FⅢ-A (442.1 kDa)、CP-FⅢ-B (154 kDa) 和CP-FⅢ-C (27.4 kDa) 三區分，CP-FⅢ-A區分糖組成以半乳糖、阿拉伯糖和甘露糖為主，並且含有顯著的活性特徵糖岩藻糖7%；CP-FⅢ-B區分以甘露糖、半乳糖和阿拉伯糖為主；CP-FⅢ-C區分以甘露糖、半乳糖和葡萄糖為主。因此由以上結果推論，巴西洋菇發酵產物中具免疫活性之多醣為一具有顯著岩藻糖之特徵與兩種多醣蛋白複合體。Agaricus blazei Murill, is an edible and medicinal mushroom. Literatures have shown that polysaccharides isolated from A. blazei contributed its immunomodulating and antitumor activities. In this thesis, the features of active polysaccharides from A. blazei mycelia fermentation products were studied. Using DEAE-Toyopearl 650M, we separated water-soluble crude polysaccharides from A. blazei Murill mycelia fermentation products into five fractions: neutral polysaccharides (CP-FI), low protein containing polysaccharides (CP-FⅡ), rich protein containing acid polysaccharides (CP-FⅢ), and two polysaccharide-protein complexes (CP-FⅣ and CP-FV). In vitro study, three fractions (CP-FⅢ, CP-FIV, and CP-FV) can significantly stimulate mouse macrophage RAW 264.7 to release TNF-a. The chemical characteristics of CP-FIII were as follows: monosaccharide composition, mannose: glucose: galatose: arabinose: fucose (45：10：30：12：3); uronic acid content, 3.5%; protein content, 3.1%; weight-average molecular weight (Mw), 398.8 kDa; polydispersity, 3.6. According to their molecular weight, FIII was further divided into three fractions: CP-FⅢ-A (442.1 kDa), CP-FⅢ-B (154 kDa) and CP-FⅢ-C (27.4 kDa). Fraction CP-FⅢ-A mainly consisted of galactose, arabinose, mannose and fucose; fraction CP-FⅢ-B mainly consisted of mannose, galactose and arabinose: fraction CP-FⅢ-C mainly consisted of mannose, glucose and galactose. The results indicated that the polysaccharides had bioactivity of TNF-a stimulation on RAW 264.7, a rodent macrophage cell line, were a fucose containing polysaccharide with high molecular weight, and two other protein-glycan complexes.總目錄 中文摘要 I 英文摘要 II 總目錄 III 圖目錄 VI 表目錄 VII 壹、前言 1 貳、文獻整理 1 ㄧ、巴西洋菇 1 (一)巴西洋菇的分類與型態特徵 1 (二)巴西洋菇的化學組成 2 (三)巴西洋菇的生理活性 2 1.抗腫瘤作用 7 2.免疫調節作用 8 3.抗氧化 9 4.其他 10 (四)巴西洋菇活性多醣之化學特性 10 1.( 1,4 ; 1,6 )-α-D-glucan 14 2.( 1,3 ; 1,6 )–β-D-glucans 14 3.Glucomannan 16 4.醣-蛋白質複合物 16 5.其他活性物質與特性 17 (五)利用離子交換層析分離巴西洋菇多醣與蛋白質 17 1.離子交換原理與膠體種類 17 2.離子交換層析之影響因子與應用 18 (六)巴西洋菇的生產方式 19 1.栽培方式簡介 19 2.豆科發酵基質－黑豆的簡介 20 二、菇類多醣之免疫調節活性及影響因子 21 (一)多醣之免疫調節活性 21 (二)影響多醣活性因子 23 1、骨幹結構 23 2、分子量 24 3、分支度 25 4、構形 26 5、化學修飾 26 參、 材料與方法 28 ㄧ、實驗流程 28 二、實驗材料 29 三、實驗藥品與試劑 29 (一)化學試劑 29 (二)標準品 29 (三)酵素 30 四、樣品製備方式 30 (一)熱水萃取液樣品的製備 30 (二)粗多醣樣品的製備 30 (三)粗多糖經蛋白質酵素水解處理樣品 30 (四)粗多醣經TCA (trichloroacetic acid) 去除蛋白質處理樣品 31 (五)陰離子交換樹脂(DEAE-650M)區分多醣 31 (六)膠體過濾層析區分多醣 31 五、分析方法 32 (ㄧ)粗多醣收率分析 32 (二)醣含量測定 - Phenol-sulfuric acid assay 32 (三)蛋白質含量測定-Modified Bradford 33 (四)醛醣酸urobic acid含量測定-(m-hydroxydiphenyl method) 33 (五)單醣組成測定 33 (六)分子量測定 34 六、TNF一以刺激活性試驗34 肆、結果與討論36 一、分離純化巴西洋聽菌絲發酵產物之水溶性多醣36 （一）巴西洋聽發酵產物萃出多醣產率與組成36 （二）粗多醣經蛋白質酵素與三氣醋酸（TCA）作用其組成變化37（三）CP、CP一P和CP一TCA以陰離子交換樹脂區分39 二、多醣對RAW2647巨噬細胞株分泌TNF一a的影響45 三、多醣區分與其組成特性47 （一）多醣之糖組成47 （二）多醣之分子量分佈49 （三）活性多醣（CP一Flll）之分子量與糖組成52 伍、結論56 陸、參考文獻57 染、附錄68 附表一、各種聽類對具有sarcoma180肉瘤天竺鼠的抗腫瘤測試結果68 附圖一、巴西洋聽菌絲發酵物粗多醣及各區分（Fl?FV）刺激小鼠巨噬細胞RAW 2647分泌TNF一a之效果691107095 bytesapplication/pdfen-US巴西洋菇多醣多醣蛋白複合體免疫調節菌絲發酵物Agaricus blazei Murillpolysaccharidespolysaccharides-protein compleximmunomodulatingmycelia fermentation productsthesishttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/56292/1/ntu-96-R94641027-1.pdf