賴秀穗2006-07-262018-07-092006-07-262018-07-091999http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/28670豬生殖與呼吸症候群病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)，屬於Arteriviridae，基因體全長15.1 kb 且包含8 個open reading frames(ORFs)。從已知的文獻中可知，ORF5 基因轉譯之蛋白是PRRSV 結構 蛋白中，與中和抗體產生最有關的蛋白。所以本篇論文的主要目的，是針對台灣 分離株FI，利用體外轉譯蛋白當抗原進行免疫及直接DNA 免疫兩種方式，探討 其ORF5 基因轉譯之蛋白是否具有誘發宿主產生中和抗體的能力。抽取台灣分 離株FI 之病毒核酸，利用反轉錄聚合酉每鏈反應(RT-PCR)，增幅出621 bp 之 ORF5 基因片段，再將此ORF5 基因片段植入pMT/Bip/V5-HisA 表現載體中， 藉由lipofectin reagent，將此表現質體轉染至Schneider 2 細胞內，進行真核系 統之蛋白質表現，經硫酸銅誘發蛋白質表現(28kDa)後，將此蛋白質表現產物免 疫BALB/c 鼷鼠，結果顯示，雖然能成功地產生28 kDa 之蛋白質產物，但此蛋 白質產物僅能誘發低量的中和抗體產生。此外，進行DNA 免疫時，重新設計引 子並進行反轉錄聚合酉每鏈反應，再將此PCR 產物植入pKAN3224 載體中，選擇 嵌有ORF5 基因之表現質體(pKAN-ORF5)，直接以肌肉注射之方式免疫BALB/c 鼷鼠，經中和抗體試驗果顯示，所有實驗組之BALB/c 鼷鼠皆有抗PRRSV 之中 和抗體產生。因此，由實驗結果證明，PRRSV 之ORF5 基因轉譯之蛋白，確實 具有誘發宿主產生中和抗體的能力，且以DNA 免疫的方式較以體外轉譯蛋白進 行免疫方式更能有效地誘發中和抗體反應的產生。application/pdf99387 bytesapplication/pdfzh-TW國立臺灣大學獸醫學系暨研究所豬繁殖與呼吸道症候群結構蛋白基因reporthttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/28670/1/882313B002071.pdf