張建成;朱錦洲張建成朱錦洲臺灣大學：陳建甫Chen, Chien-FuChien-FuChen2007-11-292018-06-282007-11-292018-06-282007http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/62388一種新式的以塑膠基底之高效能液相層積法(HPLC)技術元件，應用在蛋白質及縮氨酸之分離在這篇論文中被提出。這個以環烯烴聚合物(COC)為基底之元件包含兩個注入不同濃度洗滌液以產生梯度變化之流道，兩個為了注入蛋白質或是縮氨酸混合測試計與排放其廢液之微流道，在這四個流道之交接處並以一個”雙T字”結構之定量注入裝置連接一個分離用之迴旋流道。 這個元件結合了四個埋入在四個注入流道末端之不鏽鋼針型之介面裝置，以連接程式控制化之注射幫浦以及高阻抗壓力之閥門去控制待測樣品之注入以及洗滌分離。流道之成型是利用熱壓印之方式製造出元件內各部分之幾何結構設定，並利用環己烷在室溫下利用溶劑接合之方式達到接合之目的，這種接合方式有別於需要犧牲層或是其他複雜之製造步驟，可以避免產生污染或是降低元件製造之良率。 針型介面裝置是埋入在預先設定之適當大小儲水區域之中，再經由退火之步驟以消除其殘留應力與剪應力。針型介面裝置可以連接商業化之連接元件，進而達到簡單地與玻璃毛細管、幫浦與閥門相連接之功能。在承受壓力測試中得知，此針型介面裝置可以承受到達24.8Mpa之壓力，也就是相當於244.76大氣壓之壓力，而沒有任何裂痕產生破壞此元件。 製造元件完成之後，經由紫外光激發化學試劑反應在微流道表面，接著用光聚合的方式生成多孔之聚甲基丙烯酸丁酯-交鏈劑二甲基丙烯酸酯之多孔性整體式聚合物，隨著梯度洗滌之方式而達到蛋白質與縮氨酸分離之目的。 梯度洗滌是由同時注入低與高濃度之有機溶劑，在控制不同注入速度下經由在兩種溶劑交會處之奈升等級之溝槽結構微混合器混合所達成。 初步的分離測試展示在三十分鐘內，元件便可以將蛋白質與縮氨酸之混合劑達到良好之分離結果。這個聚合物基底之元件可以連續操作五天並且沒有任何分層或是裂痕等毀壞之現象產生。A novel technique of polymer-based monolithic high performance liquid chromatography (HPLC) is proposed for peptides and proteins separation on chip. The cyclic olefin copolymer (COC) chip consists of the two injection channels for gradient elution delivery, two injection channels for sample injection and waste, and one spiral separation channel regulated with “double-T” cross-injector. This device is integrated with 4 embedded needles at reservoirs which are located at the end of injection channel for connecting programmable syringe pumps and shut-off valves to control sample injection and elution. After hot-embossed process to imprint channel geometric pattern, the chip is bonded by cyclohexane at room temperature without sacrificial material or other complicated processes which may cause contaminate or decrease yield production. The needles are inserted in suitable size reservoirs followed with annealing to eliminate residual stress and shear stress. The needle interface could connect with union which is easy to integrate with capillary, pump and valve. It could withstand of pressure as high as 24.8Mpa (244.76 atm) without crack observed on the chip. The UV-initiated grafting COC microfluidic chips followed by polymerization of porous poly(butyl methacrylate-co-ethylene dimethacrylate) monolith has achieved protein and peptide separation with gradient eluting. The gradient is generated by simultaneously injecting low and high concentration organic solvents with different injection velocities through a nanoliter mixer with optimized grooved structures located at the converging of 2 injection channels. Preliminary separation tests show that peptide and protein mixtures were well separated in 30mins. The polymer-based chip could operate 5 days for continuous separation test without delamination or cracks.致謝 中文摘要 Abstract 論文結構大綱 第一章 導論 1 1.1. 概論 1 1.2. 幾合結構製程技術 7 1.3. 熱塑性元件接合技術 10 1.4. 介面裝置 13 1.5. 微液體混合器 16 1.6. 微流道中之多孔性整體式聚合物 18 第二章 理論基礎 21 2.1. 層析 21 2.2. 解析度與效能在液相層析分離分析 27 2.3. 表面張力幫浦 29 2.4. 藉由不對稱交錯式溝槽結構增進波動動作以及混合效能 34 第三章 設計概念與元件設定 36 3.1. 基底材料選擇 36 3.2. 基底材料特性分析 37 3.3. 表面張力致動式微液體混合器設計 39 3.4. 塑膠化之液相層析蛋白質與縮氨酸分析元件設計 41 第四章 製程步驟與實驗設定 43 4.1. 表面張力致動式奈升級微液體混合器 43 4.2. 熱壓模微影技術 45 4.3. 溶劑接合 46 4.4. 針型介面裝置 48 4.5. 表面處理 49 4.6. 多孔性整體式聚合物 50 4.7. 元件可承受壓力測試 51 第五章 結果與討論 53 5.1. 表面張力致動式奈升級微液體混合器 53 5.1.1. 有無不對稱交錯式凹槽結構之影響 53 5.1.2. 不對稱交錯式凹槽結構對混合效率之控制參數 54 5.2. 熱壓模微影技術 57 5.2.1. 壓模溫度 58 5.2.2. 脫模溫度 59 5.3. 溶劑接合 61 5.3.1. 溶劑暴露接觸在欲接合表面之處理時間 62 5.3.2. 接合時所施加之正向壓力 63 5.3.3. 接合所需要等待聚合鍵在介面交互擴散穩定之時間 64 5.3.4. 附註製程訣竅 64 5.4. 針型介面裝置 66 5.5. 表面處理 70 5.6. 多孔性整體式聚合物 72 5.7. 元件可承受壓力測試 76 5.8. 蛋白質與縮氨酸混合試劑之分離結果 76 5.8.1. 蛋白質混合試劑之分離結果 78 5.8.2. 縮氨酸混合試劑之分離結果 79 第六章 結論與未來展望 81 6.1. 結論 81 6.2. 未來展望 83 參考文獻 8612360534 bytesapplication/pdfen-US表面張力微液體介面裝置溶劑接合微混合器塑膠基底高效能液相層析蛋白質與縮氨酸分離surface tensionworld-to-chip interfacesolvent bondingmicromixerplastic-based HPLCprotein and peptide separation[SDGs]SDG11thesishttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/62388/1/ntu-96-D91543012-1.pdf