詹國禎臺灣大學：電機工程學研究所蕭志遠Hsiao, Chih-YuanChih-YuanHsiao2007-11-262018-07-062007-11-262018-07-062004http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/53411共焦顯微鏡對於厚樣品的觀測是一非常有用的工具，藉由它可以取得內部之清晰影像。其主要特色如下，它是一種非侵入式的光學觀測技術，同時它更提供了空間濾波的特性，因此可以避免非焦平面之雜訊的干擾，進而取得樣品之切片影像。共焦顯微鏡亦可搭配螢光顯微技術，利用對生物組織特定部位染色，來突顯此部位的訊號，所以可得到對比度較好的生物影像。基於以上種種特點，它廣泛地被運用在生物醫學領域的研究上。在本論文中，我們設計且架設一台共焦螢光顯微系統，之後便針對一些系統特性進行評估，在解析度的測試方面，如以波長632.8 ，數值孔徑0.65的情況下，評估本系統之橫向與縱向解析率大約是0.8 與2.7 。在生物樣品的測試上，我們利用洋蔥表皮與老鼠皮膚作為樣品，驗證系統的光學切片能力。由實驗的結果得知，系統在解析度上可達到高的空間解析率，亦可利用於生物樣品的光學切片。中文摘要..............................…………………………………................………I 英文摘要..............................……………………………...……................……II 表目錄索引..............................……………………………...…….............….Ⅳ 圖目錄索引..............................…………………………….…...................….Ⅴ 第一章 緒論 1-1. 前言..............................…………………………………...................1 1-2. 研究動機及目的................………………………….........................2 1-3. 共焦顯微術發展...........………………………..................................4 第二章 共焦顯微系統的相關理論 2-1. 共焦顯微術原理............…………………………….........................6 2-2. 共焦顯微術之成像理論 2-2-1. 薄透鏡之繞射.......…………...………..................................11 2-2-2. 共焦成像系統的橫向與縱向解析率……………................19 2-2-3. 針孔大小對共焦顯微系統的影響………………………....24 2-3. 單光子螢光激發原理與螢光特性.....…………………..................25 2-4. 鎖像放大器之原理…………………………………………….…..29 第三章 系統設計與實驗方法 3-1. 光學系統與元件……………………………………………….…..31 3-2. 掃描系統.............………………………………..............................42 3-3. 實驗樣品製作與準備......……….....................................................45 第四章 實驗結果分析及討論 4-1. 平移台速度量測與校正…………………………………………...52 4-2. 系統解析度量測及校正 4-2-1. 縱向解析度的量測結果……………......................................54 4-2-2. 橫向解析度的量測結果......…………………........................55 4-3. 螢光激發效率測試……………………………………………..….57 4-4. 樣品量測 4-4-1 偵測反射光訊號的共焦顯微系統之樣品量測……………59 4-4-2 偵測螢光訊號的共焦顯微系統之樣品量測………………61 4-5. 影響掃描深度因素之探討………………………………………...65 第五章 結論.............................………………………………….....................70 參考文獻...................................................……………………………………721659571 bytesapplication/pdfen-US共焦顯微術confocal microscopythesishttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/53411/1/ntu-93-R91921104-1.pdf