蔣丙煌臺灣大學:食品科技研究所吳帛儒Wu, Po-JuPo-JuWu2010-05-112018-06-292010-05-112018-06-292009U0001-0708200900333100http://ntur.lib.ntu.edu.tw//handle/246246/182205NPY為神經胜肽酪氨酸 (neuropeptide tyrosine) 之簡稱，由36個胺基酸所組成，廣泛地分布在中樞神經與周邊神經系統，是一種能促進食慾之胜肽。在2005年Shen等人發現葡萄柚精油及其組成分檸檬油烯(limonene) 能抑制動物之食慾，而薰衣草精油及其主成分沈香醛(linanool) 則增加動物之食慾，故推測香氣成分能刺激或抑制嗅覺神經分泌NPY，進而影響攝食行為。實驗室之前的研究發現，以檸檬油烯及沈香酫處理培養兩天之大鼠嗅覺細胞株 Rolf B1. T cells 10分鐘，可以作為抑制及刺NPY mRNA 表現的篩選平台。本研究則以此篩選平台篩選出具有潛在刺激NPY mRNA 表現之香料物質，並進一步藉由人體試驗驗證之。實驗結果發現，篩選之十三種香料物質中，蘑菇醇(octenol) 、蒎烯 (pinene) 及 methyl phenylactetate 均顯著地刺激嗅覺細胞表現PY mRNA，故挑選蘑菇醇與蒎烯作人體實驗之驗證。人體實驗則分別以下列香氣刺激人類嗅覺 5、10、15 min，並測其血漿內NPY量之變化。另外，由脂肪細胞所分泌的leptin能與NPY作用相互拮抗，當leptin大量分泌時會抑制NPY促進攝食的作用。因此，本研究亦分析血漿內leptin之含量。本研究以水作為控制組，檸檬油烯作為負控制組，正控制組為沈香醛，試驗樣品為蘑菇醇及蒎烯。實驗結果發現，予以檸檬油烯之負控制組中血漿內NPY含量之變化在10 min時下降最多(-11.54%)，顯示其具有抑制食慾之潛力。正控制組中，予以受試者沈香醛5及10 min均可增加血漿內NPY之含量(22.92%, 5.71%)；蘑菇醇之組別亦在5、10及15 min之刺激下均可增加血液內NPY之含量(13.67%, 3.29%,5.21%)；但蒎烯之組別，血漿內NPY含量之變化較不明顯。至於，血漿內leptin之變化，由於其易受多種生理因子影響，故實驗結果缺乏一致性。另外，在受試 5、10及15分鐘後，受試者之血壓及耳溫均無顯著改變。在問卷方面，從受試者對於問卷之回應結果難以看出其與血漿內NPY及leptin含量變化之關係性。Neuropeptide tyrosine (NPY), a 36-amino acid peptide, is widely present in the central and peripheral nervous system, especially abundant in the brain. NPY is the most important stimulator of food intake. On the other hand, essences such as limonene and linalool, which are respectively the major components of grapefruit oil and lavender oil, have been verified to influence (decrease/increase) appetite in rats. Therefore, we propose that appetite regulation effect of spices might be connected with the secretion of NPY. n a previous study, we had established a NPY expression screening model by culturing olfactory nerve cells Rolf B1.T for 2 days and treating cells with limonene and linalool for 10 min. Thus, in this study, we used this model to screen thirteen spices and expected to find potential spices that could stimulate NPY mRNA expression of Rolf B1.T cells. Furthermore, a clinical trial was implemented to study the effects of these spices on the human physiological indicators, including ear temperature, blood pressure, and plasma NPY secretion. Furthermore, leptin is synthesised by adipocytes in proportion to the levels of stored triglycerides, and is a key hormone in the regulation of food intake and energy expenditure. This research also analyzed the leptin content in plasma. In addition, personal’s questionnaire was used to further investigate the relationship between food intake and aroma components. n NPY expression screening model, our result indicated that octenol, pinene, and methyl phenylacetate significantly increased NPY mRNA levels in the Rolf B1.T cells. Moreover, the results of clinical trial were as follows: 1) when the experimental period was 10 min, limonene (negative control) decreased plasma NPY level, indicating that it might inhibit appetite, 2) when the experimental periods were 5, 10 min, linalool (positive control) increased plasma NPY level, indicating that it might stimulate appetite, 3) when the experimental periods were 5, 10 and 15 min, octenol could increase plasma NPY level, revealing that it might be a potent stimulator of food intake, 4) the plasma NPY level in the pinene group had no obviously changes at any experimental time. However, the results of plasma leptin concentrations were inconclusive. We suspected that it was influenced by other physiological factors. Blood pressure and ear temperature were not significantly changed at any experimental time.目錄試委員審定書 I誌摘要 II要 IIIbstract IV錄 VI目錄 IX目錄 XI一章 前言 1二章 文獻回顧 3一節、食品香料 3、簡介 3、食品香料之定義 3、食品香料之分類及種類 3、食品香料的功能性 7二節、人類之嗅覺系統 13、簡介 13、嗅覺器官的組成 13、嗅覺訊息之傳遞路徑 14、香料物質經由嗅覺影響生理之特性 15、嗅神經鞘細胞 (olfactory nerve ensheathing cells) 20、存在嗅覺細胞內，調控食慾之激素 20三章 研究動機與架構 29一節、研究動機 29二節、研究架構 30四章 實驗材料與方法 32一節、實驗材料 32、細胞株 32、實驗藥品與試劑 32、 主要設備與儀器 34二節、實驗方法 35、細胞培養 35、基因表現 37、人體試驗 43五章 實驗結果與討論 52一部份實驗結果 52、試驗樣品（香料物質）對嗅覺神經細胞Rolf B1.T 15 min下存活率之影響 52、試驗樣品（香料物質）刺激嗅覺神經細胞 Rolf B1. T 10分鐘對NPY mRNA表現之影響 61ㄧ）Total RNA extraction品質的鑑定 61二）RNA之反轉錄（Reverse transcription） 61三）瓊脂醣膠體電泳法（Agarose gel electrophoresis） 63四）即時定量聚合酶連鎖反應 (Real-Time Quantitative PCR) 64二部份實驗結果 73ㄧ）受試者基本資料 73二）受試前，受試者血漿中NPY與leptin含量之關係性且血漿中NPY、leptin含量與年齡、體脂、身體質量指數（BMI）及性別之關係性 75三）受試5、10及15分鐘，受試者血漿中NPY、leptin含量之變化 83四）以香料物質刺激5、10及15分鐘後受試者耳溫及血壓之變化 99五）問卷結果與受試者血漿中NPY及leptin含量變化之相關性 101六章 結論 106七章 參考文獻 107件 122錄 期刊格式 127目錄2-1、嗅覺訊息傳遞路徑 142-2、嗅覺訊號處理的主要路徑 162-3、自主神經系統包含（A）交感神經及（B）副交感神經 192-4、能量平衡之生理調控. 262-5、神經胜肽Y 在嗅覺系統的分泌表現 285-1、以s-(-)-limonene處理嗅覺神經細胞Rolf B1.T 15 分鐘對其存活率之影響 555-2、以(+/-)-Linalool處理嗅覺神經細胞Rolf B1.T 15分鐘對其存活率之影響 555-3、以citronellal，citronellol 與 geraniol處理嗅覺神經細胞Rolf B1.T 15分鐘對其存活率之影響 565-4、以eucalypyol，methyl phenylacetate 與 octenol處理嗅覺神經細胞Rolf B1.T 15分鐘對其存活率之影響 565-5、以vanillin 處理嗅覺神經細胞Rolf B1.T 15分鐘對其存活率之影響 575-6、以capsaicin 處理嗅覺神經細胞Rolf B1.T 15分鐘對其存活率之影響 575-7、以pinene 與 citral對嗅覺神經細胞Rolf B1.T 15分鐘對其存活率之影響 585-8、以curcumin 處理嗅覺神經細胞Rolf B1.T 15分鐘對其存活率之影響 585-9、以diallyl sulfide處理嗅覺神經細胞Rolf B1.T 15分鐘對其存活率之影響595-10、以diallyl disulfide 處理嗅覺神經細胞Rolf B1.T 15分鐘對其存活率之影響 595-11、RNA濃度及品質 625-12、（A）RNA之品質及濃度 （B）甲醛洋菜膠體電泳觀察RNA品質 625-13、cDNA之濃度及品質 625-14、cDNA 經聚合酶連鎖反應放大產物之結果 635-15、嗅覺神經細胞經不同樣品處理10 min後NPY mRNA 基因之表現 685-16、嗅覺神經細胞經不同樣品處理10 min後NPY mRNA 基因之表現 695-17、嗅覺神經細胞經不同樣品處理10 min後NPY mRNA 基因之表現 705-18、嗅覺神經細胞經不同樣品處理10 min後NPY mRNA 基因之表現 715-19、受試前，受試者血漿中NPY與血漿中leptin含量之相關性 785-20、受試前，受試者年齡與血漿中NPY及leptin含量之相關性 795-21、受試前，受試者體脂與血漿中NPY及leptin含量之相關性 805-22、受試前，受試者BMI與血漿中NPY及leptin含量之相關性 815-23、受試前，受試者性別與血漿中NPY及leptin含量之相關性 825-24、給予各種香氣5、10及15分鐘後受試者血漿中NPY含量之變化 885-25、給予各種香氣5、10及15分鐘後受試者血漿中leptin含量之變化 89目錄2-1、香料物質之結構、來源及功能性 82-2、精油之組成與功能 112-3、神經胜肽Y、胜肽YY與胰臟多胜肽 245-1、各香料物質在15分鐘處理時間下對於嗅覺神經細胞之安全濃度 605-2、不同濃度之香料物質刺激嗅覺神經細胞表現NPY mRNA之變異百分比 725-3、受試者基本資料 745-4、 給予各種香氣5、10及15分鐘後受試者血漿中NPY含量之變化 885-5、 給予各種香氣5、10及15分鐘後受試者血漿中leptin含量之變化 895-6、各種香料物質刺激後血漿中NPY平均變化量及人數分佈 925-7、 各種香料物質刺激後血漿中leptin平均變化量及人數分佈 925-8、依性別探討受試後血漿中平均NPY之變化 925-9、依性別探討受試後血漿中平均leptin之變化 945-10、控制組受試者血漿中NPY及leptin之含量變化 965-11、負控制組limoene受試者血漿中NPY及leptin之含量變化 965-12、正控制組linalool受試者血漿中NPY及leptin之含量變化 975-13、試驗樣品pinene受試者血漿中NPY及leptin之含量變化 975-14、試驗樣品octenol受試者血漿中NPY及leptin之含量變化 985-15、以香料物質刺激5、10及15分鐘後之耳溫變化 1005-16、以香料物質刺激5、10及15分鐘後之血壓變化 1005-17、受試5分鐘問卷結果與受試者血漿中NPY及leptin含量變化之相關性 1035-17、受試10分鐘問卷結果與受試者血漿中NPY及leptin含量變化之相關性 1045-17、受試15分鐘問卷結果與受試者血漿中NPY及leptin含量變化之相關性 105application/pdf5396345 bytesapplication/pdfen-US神經胜肽酪氨酸嗅覺神經細胞食慾芳香療法人體血漿NPYNPYolfactory nerve cellsappetitearomatherapyhuman plasma NPYthesishttp://ntur.lib.ntu.edu.tw/bitstream/246246/182205/1/ntu-98-R96641002-1.pdf