Isolation and characterization of antibiotic-resistant bacteria from coastal waters of Taiwan

本研究為了瞭解臺灣沿岸海域中抗四環黴素或抗氯黴素之細菌的豐度及其特性，於2007至2008年間，在臺灣的花蓮沿岸、基隆港口、新竹香山濕地、臺南四草外海設置採樣點進行採樣。 將樣本經過序列稀釋後，吸取定量稀釋水樣加入含有四環黴素或氯黴素的PY培養液進行增殖培養並且利用最大可能數法估算異營性細菌及抗藥性細菌在環境中的數量。實驗結果顯示，本研究各採樣地點所測得四環黴素抗性細菌的豐度明顯高於氯黴素抗性細菌的豐度。 將增殖過後的培養液塗盤待菌落生成後，挑選單一菌落並利用連續畫線法將分離株進行分離、純化和保存。各採樣地點共分離出86株對四環黴素或氯黴素具有抗藥性之細菌。再萃取所有分離株的DNA以PCR將各分離株的16S rDNA增幅擴大，以3種限制酶 (DdeI、RsaI和HhaI) 進行限制片段長度多樣性分析，共可分為15種基因型，代表株經16S rDNA定序，並與標準菌株序列比對，可歸類為Acinetobacter, Aeromonas, Alcanivorax, Alteromonas, Corynebacterium, Escherichia, Pseudoalteromonas, Pseudomonas, Serratia, Shewanella與Vibrio等十一屬之菌種，其中Corynebacterium屬於Actinobacteria，其餘十屬皆屬於γ-Proteobacteria。觀察分離株的生長特性、生理特性及菌落的形態特性和親緣之分析結果顯示A25 (Shewanella sp ), D6 (Pseudomonas sp.) 與X4 (Pseudomonas sp.) 三株分離株均可能為新種。研究最先發現水生環境中Altermonas, Alcanivorax 與Corynebacterium可能包含具四環黴素抗性基因之細菌；Acinetobacter, Alcanivorax, Altermonas與Serratia可能包含具氯黴素抗性基因之細菌。